Therapeutische Wirkung von Cistanche Deserticola auf den Stuhlgang im Rattenmodell mit seniler Verstopfung
Mar 27, 2022
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Xia Zhang, Fa-Juan Zheng, Zhen Zhang
Abstrakt
HINTERGRUND
Obstipation gehört zu den chronischen Magen-Darm-Funktionserkrankungen. Es beeinträchtigt die Lebensqualität erheblich. Cistanche deserticola (C. deserticola) kann Verstopfung offensichtlich behandeln, aber ihr Mechanismus wurde nicht geklärt. Wir nahmen an, dass dieser Mechanismus die Darmmotilität verbessert, indem er interstitielle Cajalzellen (ICC) stimuliert. Die Aktivierung des C-kit-Rezeptors auf der Oberfläche von ICC steht in engem Zusammenhang mit der ICC-Funktion, und die Stammzellfaktor (SCF)/C-kit-Signalwege spielen dabei eine wichtige Rolle. Um den Mechanismus zu untersuchen, wie C. deserticola Verstopfung behandelt, zielte diese Studie darauf ab, ein Verstopfungsmodell bei Ratten zu etablieren und die Rolle des SCF/C-kit-Signalwegs bei der Behandlung zu untersuchen.
ZIEL
Es sollten die SCF/C-Kit-Signalwege in der Rolle von C. deserticola für die Behandlung von Obstipation durch ein Obstipationsrattenmodell untersucht werden.
METHODEN
Achtundvierzig 8- Monate alte Sprague-Dawley-Ratten wurden durch Randomweight-Methode in 4 Gruppen eingeteilt: Normalgruppe (n=12), Modellgruppe (n=12), C. deserticola-Gruppe (n=12) und Blockergruppe (n=12). Die normale Gruppe erhielt normale Kochsalzlösung per Sonde; die Modellgruppe erhielt Loperamid per Schlundsonde; die Blocker-Gruppe erhielt Loperamid und C. deserticola per Magensonde, und STI571 wurde intraperitoneal injiziert. Während der Behandlung wurden alle 10 Tage das Gewicht, die Kotkörner und die Kotqualität aufgezeichnet. Am Tag 20 nach der Modellinduktion wurden die Dickdarmgewebe jeder Gruppe entfernt. Hämatoxylin- und Eosin-Färbung wurde verwendet, um pathologische Veränderungen zu beobachten. Expressionsniveaus von SCF-, C-kit- und Aquaporin-Genen wurden durch Immunhistochemie, Western-Blotting und quantitative Polymerase-Kettenreaktion in Echtzeit nachgewiesen. Die epithelialen Mitochondrien und Becherzellen des Dickdarms wurden durch Transmissionselektronenmikroskopie beobachtet.
ERGEBNISSE
Verglichen mit der normalen Gruppe nahm das Gewicht der Ratten in der Modell- und Blockergruppe mit fortschreitender Behandlung signifikant ab, das Stuhlgewicht nahm ab und die Stuhlqualität war trocken (P < {{0}}.{{6}="" }5).="" c.="" deserticola="" kehrte="" die="" abnahme="" des="" körper-="" und="" stuhlgewichts="" um="" und="" verbesserte="" die="" stuhlqualität.="" die="" histopathologische="" analyse="" zeigte,="" dass="" das="" schleimhautepithel="" des="" dickdarms="" in="" der="" modellgruppe="" unvollständig="" war="" und="" die="" anordnung="" der="" drüsen="" unregelmäßig="" oder="" beschädigt="" war.="" die="" behandlung="" mit="" c.="" deserticola="" verbesserte="" die="" integrität="" und="" kontinuität="" der="" epithelzellen="" und="" die="" regelmäßige="" anordnung="" der="" drüsen.="" die="" blocker="" hemmten="" die="" wirkungen="" von="" c.="" deserticola.="" deserticola="" erhöhte="" die="" protein-="" oder="" genexpression="" (p="">< 0,05).="" western="" blotting="" zeigte,="" dass="" die="" expression="" von="" aquaporin="" apq3="" erhöht="" war,="" während="" die="" expression="" von="" cx43="" in="" der="" modellgruppe="" abnahm.="" die="" behandlung="" mit="" c.="" deserticolain="" hemmte="" die="" expression="" von="" apq3="" und="" förderte="" die="" expression="" von="" cx43.="" transmissionselektronenmikroskopie="" zeigte,="" dass="" die="" mitochondrien="" des="" dickdarmepithels="" in="" der="" modellgruppe="" geschwollen="" und="" ungeordnet="" angeordnet="" waren="" und="" mikrovilli="" spärlich="" waren.="" besser="" war="" der="" zustand="" in="" der="" c.="" deserticola-gruppe.="" mit="" sti571-blocker="" behandelte="" mäuse="" bestätigten,="" dass="" das="" blockieren="" des="" scf/c-kit-signalwegs="" die="" verbesserung="" der="" obstipation="" durch="" c.="" deserticola="">
FAZIT
C. deserticola verbesserte die Stuhlentleerung bei Ratten mit Verstopfung, und der SCF/C-Kit-Signalweg, der ein Schlüsselglied der ICC-Funktion ist, spielte eine wichtige Rolle bei der Behandlung.
Schlüsselwörter:Cistanche Deserticola; senile Verstopfung; Stammzellfaktoren; C-Kit
frischer Cistanche-Rohstoff
EINLEITUNG
Senile Obstipation (SC) ist eine der häufigsten chronischen gastrointestinalen Funktionserkrankungen bei geriatrischen Patienten, die zerebrovaskuläre Ereignisse und andere Erkrankungen induziert oder verschlimmert und die Lebensqualität der älteren Bevölkerung ernsthaft beeinträchtigt[1,2]. Ätiologie und Pathogenese von SCare Magen-Darm-Hitze, Yin- und Jin-Mangel und Entfeuchtung des Darms[3,4], während Cistanche deserticola (C. deserticola) die Nieren erwärmen und den Darm entspannen kann. Forscher haben berichtet, dass die Wirkung von Darm Die Verbesserung der Motilität und Behandlung von SC ist klar, aber ihr Mechanismus wurde nicht geklärt [5,6]. Interstitielle Cajalzellen (ICCs) sind eine spezielle Art mesenchymaler Zellen im Gastrointestinaltrakt. Die Aktivierung des C-kit-Rezeptors auf der Oberfläche von ICCs steht in engem Zusammenhang mit der Zellproliferation, -differenzierung und -funktion. ICCs sind an der Pathogenese vieler gastrointestinaler motorischer Dysfunktionen beteiligt[7,8]. Die Aktivierung von C-kit hängt von der Bindung seines Ligandenstammzellfaktors (SCF) ab[9]. Zur Untersuchung der Wirkung und des Wirkungsmechanismus von C. Deserticola auf SC zielte diese Studie darauf ab, ein SC-Modell in Byloperidol-induzierten Ratten zu etablieren, um die Rolle des SCF/C-Kit-Signalwegs bei der Behandlung von Obstipation durch C. deserticola zu untersuchen.
MATERIALEN UND METHODEN
Experimentelle Materialien
Versuchstiere:Die Versuchstiere waren 48 männliche 8- Monate alte Sprague-Dawley-Ratten mit einem Gewicht von 500-550 g; alle gekauft von Changsha Tianqin BiotechnologyCo. Ltd. Ratten wurden im Tierlabor von Chongqing Weisiteng BiomedicalTechnology Co. Ltd. aufgezogen und erhielten normales Tag- und Nachtlicht, Futter und Getränke. Alle Verfahren entsprachen den Managementrichtlinien, die von der Ethikkommission des Krankenhauses für traditionelle chinesische Medizin in Chongqing herausgegeben wurden.
Primäre Reagenzien:Zu den primären Reagenzien gehörten Loperamid (Sigma, St. Louis, MO, USA), C. deserticola von Hubei Jurui Traditional Chinese Medicine DecoctionCo. Ltd., STI571 von Chinese Selleck Co. Ltd. und SCF, C-Kit, Connexin 43 (Cx43), Aquaporin 3 (AQP3) und -Actin-Antikörper (Abcam, Cambridge, MA, USA), PrimeScript II 1st Strang cDNA Synthesis Kit und Premix Taq™ (Ex Taq™ Version 2.0) (Takara Co. Ltd., Japan).
Cistanche-Kräuter-Extrakt-Ergänzungen
Methoden
Vorbereitung und Gruppierung von SC-Modellen:Um den Einfluss von Störfaktoren wie dem Körpergewicht auf die Versuchsergebnisse zu vermeiden, wurden die Ratten nach dem Block-Random-Gruppierungsverfahren zufällig gruppiert. Achtundvierzig Ratten wurden 1 Woche lang adaptiv gefüttert, und die Ratten wurden in der Reihenfolge ihres Gewichts von leicht bis schwer nummeriert. Entsprechend der Reihenfolge des Körpergewichts wurden die Ratten in 12 Zonen eingeteilt (das Gewicht der Ratten in jeder Zone war ähnlich), mit 4 Ratten in jeder Zone. Die 12 Zonen wurden in 4 Gruppen von 12 (normal, Modell, C. deserticola und Blocker) eingeteilt. Ratten in der Modellgruppe wurde Loperamid (0.0625/100 g, 10 ml/kg) per Schlundsonde verabreicht. Die erste Sondendosis wurde verdoppelt, und das Medikament wurde jeden Tag um 10:00 Uhr einmal täglich an 20 aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht. Der Normalgruppe wurde die gleiche Menge physiologischer Kochsalzlösung per Schlundsonde verabreicht. Zusätzlich wurde die Modellgruppe mit C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) per Schlundsonde behandelt. Der Blockergruppe wurde C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) durch Sondenernährung und STI571 (25 mg/ml, 1 ml/kg) durch intraperitoneale Injektion verabreicht. Während des Experiments wurden Körpergewicht, Stuhlgewicht und Stuhlbeschaffenheit alle 10 Tage aufgezeichnet. Bei keiner der Ratten trat ein Unfalltod auf. Zwanzig Tage später wurden die Ratten getötet, und das Dickdarmgewebe wurde zur Untersuchung und Aufbewahrung in flüssigem Stickstoff entfernt. Die restlichen Teile wurden befestigt und eingebettet.
Histopathologische Analyse:Die über Nacht gefasteten Ratten wurden am nächsten Tag durch intraperitoneale Injektion mit 7 Prozent Chloralhydrat (5 ml/kg) anästhesiert. Der Bauch wurde geöffnet, um das Dickdarmgewebe zu trennen, und 8-10 mm des Dickdarms wurden entfernt. Der Darminhalt wurde durch leichtes Schütteln in vorgekühltem Polybutylensuccinat entfernt und für 24 h in einer 4-prozentigen Paraformaldehyd-Fixierlösung fixiert. Es wurde eine herkömmliche Paraffineinbettung durchgeführt. Gewebeschnitte (5 &mgr;m) wurden für Hämatoxylin- und Eosin-Färbung entnommen, und die histopathologische Morphologie wurde unter einem Mikroskop beobachtet.
Nachweis der Expression von SCF und C-kit durch immunhistochemische Färbung:Die oben histopathologisch untersuchten Paraffingewebe wurden geschnitten, mit geschnittenem, mit Xylol entparaffiniertem Gradienten-Ethanol rehydriert, das Antigen durch Hitze beseitigt und für 1 h mit Ziegenserum bei Raumtemperatur versiegelt. Primäre SCF- und C-Kit-Antikörper wurden tropfenweise zugegeben, und die Gewebe wurden über Nacht bei 4 Grad gehalten. Nach dem Spülen mit Polybutylensuccinat wurde Meerrettichperoxidase zugetropft, um den sekundären Antikörper zu markieren, mit Polybutylensuccinat für 5 min gespült, Tropfen 2, 4--Diaminobuttersäure-Chromogenlösung, erneutes Färben mit Hämatoxylin, Dehydratisierung mit umgekehrtem Gradientenalkohol, transparent gemacht mit Xylol und einer neutralen Lösung Harzdichtung. Mikroskopisch waren die Kerne purpurblau, und die positiven Ergebnisprodukte waren bräunlich-gelbe oder gelbe Partikel.
Nachweis der Expression von C-kit mRNA in Dickdarmgewebe durch real-time-quantitative Polymerase-Kettenreaktion (RT-qPCR):Gefrorenes Dickdarmgewebe von Ratten wurde mit einem Homogenisator zerkleinert und 1 ml RNAiso Plus wurde zugegeben. Die Gesamt-RNA des Dickdarmgewebes wurde durch das Chloroform/Isopropanol-Verfahren extrahiert, und die RNA-Qualität wurde durch Gelelektrophorese nachgewiesen. Nach Identifizierung durch einen Gel-Imager von Bio-Rad wurde 1 ug RNA mit dem Takara PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit revers in cDNA transkribiert. Gemäß der NCBI-Datenbank Gene ID: 64030 wurde die CDS-Region des C-kit-Gens gefunden und kombiniert NCBI Primer-Blast-Design Primersequenz, die von Sangon Biotech Co. Ltd. synthetisiert wurde, C-Kit-Primersequenz Sense-Strang 5'-AGGT GTACCGTTCCTCTGCCC-3', Antisense-Strang 5'-GGCTGGATTTGCTCTTTGCTGT-3', - Actin-Sense-Strang 5'-CTTCCTTCCTGGGTATGGAATC-3', Antisense-Strang 5'-CTGTGTTGGCATAGAGGTCTT-3'. Die PCR-Amplifikation wurde auf einem Bio-RadCFX90 Real-Time PCR-Instrument durchgeführt. Die Bedingungen für den PCR-Assay waren anfängliche Denaturierung bei 95 Grad für 5 Minuten, 30 Zyklen von 95 Grad für 30 Sekunden, 60 Grad für 30 Sekunden und 72 Grad für 1 Minute, gefolgt von einer abschließenden Verlängerung bei 72 Grad für 10 Minuten. 2-ΔΔCt (ΔCt=Ct-Wert - - Aktin-Ct-Wert) wurde verwendet, um die relative Genexpression zu analysieren.
Nachweis des Proteinexpressionsniveaus von Cx43 und AQP3 in Dickdarmgewebe durch Western Blotting:Etwa 1 cm gefrorenes Dickdarmgewebe wurde gesammelt und mit starker RIPA-Pyrolyseflüssigkeit (100 &mgr;l) lysiert. Das Gewebe wurde 20 Mal mit einem Glashomogenisator homogenisiert und in ein 1,5-ml-Zentrifugenröhrchen überführt. Der Überstand wurde nach 5-minütiger Zentrifugation bei 12000 U/min bei 4 Grad extrahiert, und die Konzentration des Gesamtproteins im Überstand wurde durch das BCA-Verfahren bestimmt. Wir entfernten 25 ug denaturiertes Protein, um eine Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese durchzuführen, und übertrugen dann die Proteine in dem Gel auf eine Polyvinylidenfluoridmembran bei einem konstanten Strom von 200 mA, dann versiegelt durch 5 % Magermilcheinschlussflüssigkeit für 2 Stunden bei Raumtemperatur. Entsprechende Primärantikörper wurden mit Sperrflüssigkeit verdünnt, über Nacht bei 4 Grad inkubiert, dann der Membranwiderstand gewaschen und Zweitantikörper zugegeben. Nach der Zugabe von ECL-Flüssigkeit wurden sie für den Test durch eine Analyse der optischen Dichte unter das Belichtungsmessgerät gelegt.
Transmissionselektronenmikroskopie:Wir nahmen etwa 1 cm proximales Dickdarmgewebe, fixierten es 24 Stunden lang in 2,5 Prozent Glutaraldehyd, dehydrierten es mit abgestuftem Aceton, betteten es in Epon812 ein und schnitten 50 nm ultradünne Schnitte auf einem Ultramikrotom. Die Schnitte wurden mit Urandioxidacetat und Bleicitrat-Färbeflüssigkeit bei Raumtemperatur für 10 min gefärbt. Wir beobachteten Dickdarmzotten, Epithelzellenmitochondrien und Becherzellen unter einem Transmissionselektronenmikroskop von Philips Tecnai-10.
statistische Analyse
Die SPSS 19.0-Software wurde für die Datenanalyse verwendet, und die GraphPad Prism8.4-Software wurde zum Plotten der Ergebnisse verwendet. Der Shapiro-Wilk-Test wurde zum Testen der Normalverteilung verwendet. Daten mit Normalverteilung wurden durch Mittelwert ± Standardabweichung dargestellt. Fehlerelemente wurden verwendet, um den Mittelwert ± Standardabweichung des Hämoglobins nach der Behandlung darzustellen. Der Student's t-Test wurde zum Vergleich zwischen zwei Gruppen verwendet. Die Varianzanalyse wurde zum Vergleich zwischen mehreren Gruppen verwendet. Die Student-Newman-Keuls-Methode wurde zum paarweisen Vergleich zwischen mehreren Gruppen verwendet, und der Dunnett-Test wurde verwendet, um die Unterschiede zwischen jeder experimentellen Gruppe und der Kontrollgruppe nacheinander zu messen. Zugehörige Daten wurden zu mehreren Zeitpunkten gemessen, und es erfolgte eine wiederholte Messdatenanalyse der Varianz geführt. Wenn der Sphärizitätstest P > 0 zeigte.{{10}}5, wurde eine Varianzanalyse der wiederholten Messdaten verwendet. Wenn P < 0,05,="" wurde="" die="" verallgemeinerte="" schätzungsgleichung="" genommen.="" daten,="" die="" keiner="" normalverteilung="" entsprachen,="" wurden="" durch="" m="" (p25,="" p75)="" dargestellt,="" und="" der="" kruskal-wallis-h-rangsummentest="" wurde="" zum="" vergleich="" zwischen="" den="" gruppen="" verwendet.="" der="" χ2-test="" wurde="" verwendet,="" um="" zwischen="" gruppen="" zu="" vergleichen,="" wenn="" die="" daten="" ungeordnete="" daten="" waren,="" und="" pearsons="" χ2-test="" wurde="" verwendet,="" wenn="" der="" anteil="" der="" zellen="" mit="" einer="" theoretischen="" häufigkeit="">< 5="">< 20="" prozent="" war.="" wenn="" der="" anteil="" der="" zellen="" mit="" einer="" theoretischen="" häufigkeit="">< 5="" größer="" oder="" gleich="" 20="" prozent="" war,="" wurde="" der="" exakte="" test="" von="" fisher="" verwendet.="" p="">< 0,05="" wurde="" verwendet,="" um="" zu="" bestimmen,="" dass="" der="" unterschied="" statistisch="" signifikant="">
Abbildung 1 Histopathologische Veränderungen des Dickdarms.
ERGEBNISSE
Allgemeine Bedingungen
Einen Tag nach der Schlundsonde von Loperamid waren im Vergleich zur Normalgruppe das Körpergewicht und das Stuhlgewicht in der Modellgruppe signifikant verringert (P < {{0}},05),="" aber="" es="" gab="" keinen="" signifikanten="" unterschied="" in="" der="" stuhlqualität="" punktzahl="" (p=""> 0,05). Die Behandlung mit C. deserticola in der Modellgruppe verlangsamte die Abnahme des Körpergewichts und des Stuhlgewichts (P< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">
Histopathologie des Dickdarms
Hämatoxylin- und Eosin-Färbung von Dickdarmgewebe von Ratten ist in Fig. 1 gezeigt. In der normalen Gruppe waren die Darmzotten intakt, die Darmschleimhaut war intakt und durchgehend, Zellen und Drüsen waren regelmäßig angeordnet. Schleimhaut und Submukosa waren nicht von Entzündungszellen infiltriert, und die Gewebestruktur war normal. In der Modellgruppe waren Darmzotten und Schleimhaut weitgehend zerstört, lokale Zotten wurden abgestoßen und locker angeordnet, und ein Teil der Drüsenstruktur verschwand. In der C. deserticola-Gruppe war die histopathologische Färbung geringer als in der Modellgruppe, aber es gab Nekrose in einigen Becherzellen. Nach intraperitonealer Injektion in der Blockergruppe gab es im Vergleich zur C.deserticola-Gruppe immer noch den lokalen Verlust der Darmzotten, und es gab Fraktur und Verlust der Darmschleimhaut.
Abbildung 2 Expression von Stammzellfaktor und Verhältnis der relativen optischen Dichte in Dickdarmgewebe durch immunhistochemischen Nachweis.
Nachweis der Expression von Stammzellfaktor und C-Kit-Protein durch immunhistochemische Färbung
Die immunhistochemische Färbung zeigte, dass SCF und C-kit im Dickdarm der Kontrollgruppe exprimiert wurden. Verglichen mit der Kontrollgruppe war die Expression von SCF und C-kit in der Modellgruppe signifikant verringert (P < 0.05).="" im="" vergleich="" zur="" modellgruppe="" war="" die="" expression="" von="" scf="" und="" c-kit="" in="" der="" c.-deserticola-gruppe="" signifikant="" erhöht="" (p="">< 0.05).="" es="" gab="" keinen="" unterschied="" in="" der="" expression="" von="" scf="" und="" c-kit="" zwischen="" den="" blocker-="" und="" modellgruppen="" (p="">< 0,05,="" abbildungen="" 2="" und="">
RT-qPCR
RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >0.05). Diese Ergebnisse zeigten, dass die durch C. deserticola angepasste C-kit-Expression an der Verbesserung der Verstopfung teilnahm und Blocker die Wirksamkeit von C. hemmten. Deserticola.
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Western-Blotting
Western Blotting zeigte, dass das AQP3-Protein in der normalen Kontrollgruppe auf einem niedrigen Niveau exprimiert wurde, während es in der Modellgruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant erhöht war (Abbildung 5) (P < 0.05)="" .="" die="" expression="" des="" aqp3-proteins="" war="" nach="" der="" behandlung="" mit="" c.="" deserticola="" verringert,="" und="" die="" hemmende="" wirkung="" von="" c.="" deserticola="" auf="" die="" expression="" von="" aqp3="" wurde="" durch="" eine="" blockerbehandlung="" gehemmt="" (p="">< 0,05).="" die="" expression="" von="" cx43="" war="" der="" von="" aqp3="" entgegengesetzt.="" diese="" ergebnisse="" legten="" nahe,="" dass="" die="" pharmakologische="" wirkung="" von="" c.="" deserticola="" auf="" ratten="" mit="" sc="" durch="" die="" förderung="" der="" expression="" von="" cx43="" und="" die="" hemmung="" der="" expression="" von="" aqp3="" erreicht="" wurde="" (abbildungen="">
Transmissionselektronenmikroskopie
Nach Loperamid-Induktion traten in einigen Epithelzellen der Dickdarmschleimhaut in der Modellgruppe eine mitochondriale Schwellung und Autophagie auf. Die Anzahl und Länge der Darmmikrovilli nahm ab, und es trat eine Becherzellpyknose auf (Abbildung 8). Nach Behandlung mit C. deserticola nahm die Zahl der Mikrovilli im Darm zu. Die Mikrovilli waren ordentlich angeordnet, und die Struktur war vollständig. Kürzere Länge der Becherzellen, unregelmäßige Morphologie der Mitochondrien und schwere Pyknose der Becherzellen.
Fig. 3 Expression von C-kit und Verhältnis der relativen optischen Dichte in Dickdarmgewebe durch immunhistochemischen Nachweis.
DISKUSSION
Verstopfung ist in der älteren Bevölkerung weit verbreitet und eines der häufigsten Symptome, die den Gesundheitszustand und die Lebensqualität älterer Menschen beeinträchtigen[10,11]. In Bezug auf die traditionelle chinesische Medizin glaubten Bai et al. [12], dass die grundlegende Pathogenese von SC die Dysfunktion der Dickdarmleitungsfunktion, seniles Körperversagen, allmählicher Verlust der Leber- und Nierenfunktionen, Qi- und Blutmangel und Verlust von Körperflüssigkeit war , was zu trockenem Stuhl führte, was zu Verstopfung führte [13]. SC übt in vielerlei Hinsicht Druck auf Patienten und ihre Familien aus, und es ist wichtig, ihre Pathogenese zu erforschen.
C. deserticola hat die Funktion, das Nieren-Yang zu tonisieren, das Blut zu fördern und die Immunität des Körpers zu regulieren[14]. C. deserticola und chinesischer Kräutersud mit C. Deserticola wird häufig zur Behandlung von Verstopfung eingesetzt, und die klinische Wirkung ist bemerkenswert. Du et al. [15] fanden in einem Rattenmodell für Yang-Mangel und Obstipation heraus, dass C. deserticola die Kontraktionsamplitude des isolierten Dickdarms verbesserte, die Kontraktilität des Darmtrakts stärkte und den Spiegel der gastrointestinalen Hormone wieder normalisierte. Darüber hinaus verbessern die Ballaststoffe von C. deserticola, einem Verarbeitungsnebenprodukt von C. deserticola, die Wasserhaltekapazität von Fäkalien und haben den Vorteil einer niedrigen Dosis und einer guten Wirkung bei der Ernährung des Darms und der Verbesserung der Stuhlentleerung[16]. Unsere Studie ergab, dass die Behandlung mit C. deserticola die Fäkalienfeuchtigkeit und die Histopathologie des Dickdarms von Ratten mit Verstopfung verbesserte.
ICCs kommen im gesamten Darmtrakt vor und spielen eine wichtige Rolle bei der neuronalen Kontrolle der Darmbewegung als Schrittmacher und Darmnervenübertragung[17]. Proto-Onkogen-kodierende Rezeptortyrosinkinase, C-Kit, wird von ICCs exprimiert, und SCFi ist ein Ligand von C-Kit[18]. Das SCF/C-Kit-System ist entscheidend für die Entwicklung von ICCs. Der SCF/C-Kit-Signalweg wurde während der Behandlung von Slow-Transfer-Constipation bei Ratten durch Akupunktur analysiert[19]. Elektroakupunktur am Tianshu-Punkt erhöhte die Anzahl der Dickdarm-ICCs bei mit ACK2- behandelten Mäusen, regulierte die Expression von SCF- und C-kit-Proteinen hoch und kehrte den Phänotyp von ICC um. Die Verschreibung zur Belebung von Qi und Milz kann die Expression von ICC im Dickdarmgewebe erhöhen und die Expression von C-kit und SCF-mRNA hochregulieren, wodurch die Verstopfungssymptome verbessert werden [20]. In unserer Studie zeigte die Immunhistochemie, dass C. deserticola die Expression von SCF und C-kit-Protein in einem Rattenmodell von SC signifikant hochregulierte, und RT-qPCR zeigte, dass C. deserticola die Expression von C-kitmRNA signifikant hochregulierte. Der C-Kit-Blocker hemmte die durch C. deserticola induzierte Hochregulierung der SCF- und C-Kit-Expression.
Der Wassergehalt im Stuhl und der Wassertransport im Dickdarm sind eng mit den AQPs verbunden, die eine wichtige Rolle im Darmwasserstoffwechsel spielen[21]. In einer Studie an Ratten mit Slowtransport-Obstipation verbesserte Defäkationssud signifikant die Verstopfungsymptome, indem es die intestinale Wasseraufnahme durch Herunterregulieren von AQP3 und AQP4 regulierte[22]. In einem Rattenmodell für funktionelle Verstopfung kann der Behandlungsmechanismus von oraler Xiaofu Tongjie-Flüssigkeit für funktionelle Verstopfung durch Regulierung der Expression von vasoaktivem intestinalem Polypeptid und AQP3 im Dickdarm realisiert werden[23]. Gapjunctions spielen eine wesentliche Rolle bei der Vermittlung der synchronen Kontraktion glatter Muskelzellen. Cx43 ist dabei das wichtigste Protein[24]. Der Verlust der Cx43-Expression kann teilweise für die motorische Dysfunktion der glatten Muskulatur verantwortlich sein[25]. Die Wiederherstellung der Netzwerkstruktur des Darmnervensystems bei Ratten mit langsamer Verstopfung kann die Expression von Cx43 usw. und Verstopfungssymptome verbessern[26]. Die Expression von AQP3 verringert den Wassergehalt im Stuhl, was zu Verstopfung führt, was ein wichtiger Mechanismus der Verstopfung sein kann. Die Expression von Cx43 kann mit der Kontraktion der glatten Darmmuskulatur zusammenhängen und das Auftreten von Verstopfung verringern. In unserer Studie zeigte Western Blotting, dass die Cx43-Expression erhöht und die AQP3-Expression durch die Behandlung mit C. deserticola gehemmt wurde, was zu einer erhöhten Kontraktion der glatten Muskulatur und einer verringerten Wasseraufnahme führte, und eine Blockerbehandlung kehrte diese Effekte um.
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FAZIT
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass C. deserticola die Expression von AQP3 hemmen und die Expression von Cx43 über den SCF/C-kit-Weg fördern kann, wodurch die durch Loperamin induzierte Verstopfung verbessert und die Schädigung des Dickdarmgewebes bei gealterten Ratten reduziert wird. Diese Studie lieferte eine gute theoretische Grundlage für die klinische Anwendung von C. deserticola.
