Harnsäure -Senkungseffekt und Mechanismus von Acteosid und Echinacosid aus Cistanche Tubulosa extrahiert
Mar 03, 2025
Abstrakt:Ziel ist esCistanche Tubulosa.
MethodenDas Rattenmodell von Hyperuricämie (HUA) wurde unter Verwendung von Kaliumoxonat (1,5 g · kg -1 · d -1) in Kombination mit Adenin (100 mg · kg -1 · d {-1) festgelegt. The HUA model rats were randomly divided into a model control group, an allopurinol group (30 mg·kg-1·d-1 ), AS low and high (50, 100 mg·kg-1·d-1 ) dose groups, and ECH low and high (50, 100 mg · kg -1 · d -1) Dosisgruppen. Zuvor wurde eine normale Kontrollgruppe festgelegt. Nach vier Wochen Verabreichung wurde der Analysator für Blutbiochemie verwendet, um SUA -Harnstoff-, Crea-, Adenosin -Deaminase -Spiegel (ADA) und Harnsäure (UUA) im Urin nachzuweisen. Enzym verknüpft im Immunosorbent -Assay wurde verwendet, um Xanthinoxidase (XOD) -Piegel im Serum nachzuweisen. Nierengewebe wurde gesammelt und der Nierenkoeffizient gewogen und berechnet. Die Hämatoxylin -Eosin (HE) -Färbung wurde verwendet, um nierenpathologische Veränderungen zu beobachten. Die Immunhistochemie (IHC) und Echtzeit -PCR wurden verwendet, um die Protein- und mRNA -Expressionsniveaus von Urattransporter 1 (Urat1), Glucosetransporter 9 (GLUT9), organischer Aniontransporter 1 (OAT1) und organischer Aniontransporter 3 (OAT3) in Nieren -TISSue nachzuweisen. Ergebnisse als und Ech könnten die Nierenfunktion bei HuA -Modellratten verbessern, die Blutharnsäurespiegel reduzieren, die Harnsäureausscheidung fördern, die Serumspiegel von ADA und XOD herunterregulieren und die Protein- und mRNA -Expression von URAT1 und GLUT9 in Nierengewebe in Nierengewebe hochregulieren.
Schlussfolgerungen Die Phenylethanoidglycoside als und die Ech aus Cistanche Tubulosa können durch Verbesserung der Nierenfunktion bei HUA -Modellratten Harnsäure -Senkung ausüben, die ADA- und XOD -Spiegel reduzieren und die Expression von URAT1, GLUT9, OAT1 und OAT3 regulieren.
Schlüsselwörter: Cistanche Tubulosa; Acteosid; Echinacosid; Hyperurikämie; Verringerung der Harnsäure; Mechanismus
Cistanche Tubulosa -Extrakt mit 16% Acteosid
Hyperurikämie (HUA) ist eine Stoffwechselerkrankung, die durch einen gestörten Purinstoffwechsel im menschlichen Körper verursacht wird, was zu erhöhten Blutsäurespiegeln führt [1]. Es wird typischerweise diagnostiziert, wenn die Blutharnsäurespiegel 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol·l⁻¹) bei Männern und 6. {0 mg · dl⁻¹ (357. 0}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}} {2] in Frauen. Die Entwicklung einer Hyperurikämie hängt hauptsächlich mit Faktoren wie hochpurinen Diäten, chronischem Alkoholkonsum, Medikamentenverbrauch und Hypothyreose zusammen. Es erhöht nicht nur das Risiko von Herz -Kreislauf -Erkrankungen, Diabetes und Bluthochdruck [3-4], sondern wirkt sich auch signifikant auf die Gesundheit der Patienten aus.
Derzeit umfassen klinische Behandlungen für Hyperurikämie hauptsächlich Arzneimittel, die die Harnsäureproduktion hemmen und die Harnsäureausscheidung fördern. Diese Behandlungen haben jedoch bestimmte Einschränkungen für Patienten mit beeinträchtigter Leber- oder Nierenfunktion [5-6]. Daher ist die Erforschung wirksamer Arzneimittel mit geringen Nebenwirkungen von großer Bedeutung für die Prävention und Behandlung von Hyperurikämie.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. WightIn der traditionellen chinesischen Medizin als kidneytonifizierender Kraut wird häufig verwendet, um Erkrankungen wie Impotenz, Unfruchtbarkeit, Mangel an Wesen und Blut, Schwäche im unteren Rücken und Knie, Muskelschwäche und Verstopfung aufgrund der Darmtrocknung zu behandeln [7]. Studien haben gezeigt, dass dasCistanche Tubulosabesitzt neuroprotektive [8], entzündungshemmende [9], Knochenstoffwechsel [10] und Wirksamkeitsanhanzungseffekte bei der Chemotherapie bei Krebspatienten [11]. Unter seinen verschiedenen aktiven Komponenten sind Phenylethanoidglykoside am häufigsten vorkommend.
Acteosid (AS) und Echinacosid (Ech), zwei Phenylethanoidglykoside mit hohem Gehalt inCistanche Tubulosazeigen eine starke biologische Aktivität und verfügen über ein signifikantes Potenzial für Entwicklung und Anwendung. Infolgedessen wurde unsere Forschungsgruppe als weitere Untersuchung ausgewählt. Durch die Vorhersagen von Netzwerk pharmakologischen Vorhersagen und Voraussagen bei Mäusen entdeckten wir, dass Phenylethanoidglycosidextrakte vonCistanche TubulosaKann eine bestimmte Harnsäure-Senkung-Wirkung haben. Die Wege und Mechanismen dieser Effekte bleiben jedoch unklar.
Unter Verwendung der Mechanismen der Harnsäureproduktion und ihrer primären Ausscheidungswege als Forschungsfokus untersuchten wir die Harnsäurerffekte der Phenylethanoidglycosid-Extrakte als Ech. Diese Studie zielt darauf ab, die Wege und Mechanismen aufzuklären, durch die AS und ihre Harnsäurerffekte ausüben.
1 Materialien
1.1 Experimentelle Tiere
70 männliche SPF-Grade Sprague-Dawley (SD) -Ratten mit einem Gewicht von 150–180 g wurden vom experimentellen Animal Center der Xinjiang Medical University gekauft. Tierproduktionslizenznummer: scxk (xin) 2023-0001. Dieses Experiment wurde vom Animalethikausschuss des uygur Medizin-Forschungsinstituts der Xinjiang Autonomous Region mit der Genehmigungsnummer der Tierethik: Iacuc- (Zhun) -2024-009 genehmigt.
1,2 Medikamente und Reagenzien
Phenylethanoidglykosidextrakte (AS und ECH)ausCistanche Tubulosa (purity >98%, verifiziert durch Hochleistungs-Flüssigchromatographie) wurden extrahiert, gereinigt und vom wichtigsten Labor der Uygur-Formulierungswissenschaft, Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute, hergestellt. Chargennummern: 20220617 (AS) und 20220526 (Ech).
Allopurinol -Tabletten, Chargennummer: 62208726, Hergestellt von Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
KaliumoxonatUndAdenin, Batchnummern: I2130050 und C2202255, gekauft von Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Crea (Kreatinin), UA (Harnsäure), Harnstoff- und ADA -Assay -Kits (Adenosine Deaminase), Chargennummern: 141123010, 141223004, 141323008 und 043624005, gekauft von Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
XOD (Xanthin Oxidase) Aktivitäts -Assay -Kit, Chargennummer: Y10001219, gekauft von Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Antikörper (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), Batchnummern: 3i5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2i44618, gekauft von Affinity Biosciences.
HRP-markierte Ziegen-Anti-Kaninchen-Igg, Chargennummer: 245440113, gekauft von Zsgb-Bio.
Hämatoxylinfärbungslösung, Charge Nummer: 24135741h, gekauft von Peking Lanjieke Technology Co., Ltd.
DAB -chromogenes Reagenzus -Kit, Chargennummer: 240010512, gekauft von ZSGB-BIO.
DEPC (Diethylpyrocarbonat), Katalognummer: D 60029-500 ml, gekauft von Amresco (USA).
M5 Hiclear DL2000 -DNA -Marker, Katalognummer: MF025, gekauft von Peking Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Trizol ™ Reagenz, Katalognummer: 15596026, gekauft von Thermo Fisher Scientific (USA).
5x All-in-One RT MastermixUndEvagreen Express 2 × QPCR Mastermix-Low Rox, Katalognummern: G492 und G891, beide von Applied Biological Materials Inc. (ABM) gekauft.
2 Methoden
2.1 Modellaufbau und Gruppierung
70 männliche Sprague-Dawley (SD) -Ratten wurden akklimatisiert und in zwei Gruppen unterteilt: eine normale Kontrollgruppe (1 0 Ratten) und eine Modellkontrollgruppe (60 Ratten). Den normalen Kontrollgruppe wurde 0,5% CMC-NA über Gavage verabreicht. Den Modellkontrollgruppe wurde Kaliumoxonat (1,5 g · kg⁻¹) in Kombination mit Adenin (100 mg · kg⁻¹) in einer Dosis von 10 ml · kg⁻¹, einmal täglich 14 aufeinanderfolgende Tage, in Kombination mit Adenin (100 mg · kg⁻¹) verabreicht. Das Modell wurde als erfolgreich eingestuft, wenn Harnstoff-, Crea- und SUA -Spiegel signifikant zunahm, gemessen durch einen biochemischen Analysator.
The hyperuricemia model rats were further divided into the following groups based on SUA, UREA, and CREA levels: model control group, allopurinol group (30 mg·kg⁻¹), low-dose AS group (50 mg·kg⁻¹), high-dose AS group (100 mg·kg⁻¹), low-dose ECH group (50 mg·kg⁻¹), and high-dose Ech -Gruppe (100 mg · kg⁻¹), mit 10 Ratten in jeder Gruppe. Um eine stabile Hyperurikämie aufrechtzuerhalten, wurde allen Gruppen mit Ausnahme der normalen Kontrollgruppe Kaliumoxonat (500 mg · kg⁻¹) in Kombination mit Adenin (100 mg · kg⁻¹) über Gavage am Morgen in Kombination von Adenin (100 mg · kg⁻¹) verabreicht, gefolgt von der Verabreichung der jeweiligen Arzneimittel in jeder Behandlungsgruppe am Nachmittag. Die normale Kontrollgruppe erhielt am Morgen eine CMC-NA-Lösung von 0,5% und am Nachmittag mit einer Dosis von 10 ml · kg⁻¹, einmal täglich in 14 aufeinanderfolgenden Tagen. Danach wurde die Verabreichung von Modellierungsmitteln gestoppt, und die jeweiligen Medikamente wurden täglich weitere 14 Tage lang kontinuierlich verabreicht.
2.2 Beispielsammlung
Nach der endgültigen Dosis wurden die Ratten über Nacht gefastet (Wasser war nicht eingeschränkt). Der Urin aus jeder Gruppe wurde für Harnsäuretests gesammelt. Das Körpergewicht wurde nach dem Fasten gemessen und Blutproben wurden unter Narkose entnommen. Das Serum wurde durch Zentrifugation getrennt und für die zukünftige Verwendung gespeichert. Nierengewebe wurden gesammelt und gewogen. Eine Niere wurde in 4% Paraformaldehydlösung fixiert, während die andere zur weiteren Analyse in flüssigem Stickstoff in flüssigem Stickstoff geschnappt wurde.
2.3 Messung von Harnsäure im Rattenurin
Urinproben aus jeder Gruppe wurden zentrifugiert (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, Zentrifugenradius 14 cm), und der Überstand wurde gesammelt. Die Urinproben wurden 1: 9 mit Kochsalzlösung verdünnt und unter Verwendung eines biochemischen Analysators auf Harnsäuregehalt analysiert.
2.4 Messung von ADA, Harnstoff, Crea und SUA in Rattenserum
Blutproben aus jeder Gruppe wurden zentrifugiert (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, Zentrifugenradius 14 cm) und das Serum gesammelt. Die ADA-, Harnstoff-, Crea- und SUA -Spiegel im Serum wurden unter Verwendung eines biochemischen Analysators gemessen.
2,5 Messung von XOD in Rattenserum
Änderungen der XOD -Spiegel im Rattenserum wurden unter Verwendung eines enzymatischen Assays gemäß den Anweisungen des Herstellers gemessen. Die anfängliche Absorption (A₁) und die endgültige Absorption (A₂) bei 290 nm wurden aufgezeichnet, und ΔA (ΔA=A₂ - A₁) wurde berechnet. ΔA wurde in die Formel eingesetzt:
Xod (nmol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × Reaktionssystem Gesamtvolumen ÷ (molarer Extinktionskoeffizient von Harnsäure × optische Pfadlänge) × 10⁹] ÷,
Berechnung der Menge an Harnsäure -katalysierten pro Minute pro Milliliter Serum.
2,6 Messung des Nierenkoeffizienten
Nierengewebe wurden gesammelt, mit Kochsalzlösung gewaschen und überschüssiges Wasser entfernt. Das Organgewicht wurde genau gemessen und der Nierenkoeffizient wie folgt berechnet:
Nierenkoeffizient=Nierengewicht (mg) / Körpergewicht (g).
2.7 Histopathologische Beobachtung von Nierengewebe durch die Färbung
In 4% Paraformaldehydlösung fixierte Nierengewebe wurden mit abgestuften Ethanolkonzentrationen dehydratisiert, mit Xylol geräumt, in Paraffin eingebettet und in 4- μm -Scheiben geschnitten. Die Schnitte wurden mit Xylol deparaffinisiert, mit abgestufter Ethanol hydratisiert, mit Hämatoxylin und Eosin (He) gefärbt und mit neutralem Kaugummi versiegelt. Die morphologischen Veränderungen im Nierengewebe wurden unter einem Lichtmikroskop beobachtet und Bilder wurden bei 400 × Vergrößerung aufgenommen.
2.8 Nachweis von URAT1-, GLUT9-, OAT1- und OAT3 -Proteinenexpression in Nierengewebe durch IHC
In 4% Paraformaldehydlösung fixierte Nierengewebe wurden mit abgestuften Ethanolkonzentrationen dehydriert, mit Xylol geräumt, in Paraffin eingebettet und geschnitten. Antigen -Abruf und Ziegenserumsperrung wurden durchgeführt. Primäre Antikörper (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) wurden bei einer Verdünnung von 1: 200 zugegeben und über Nacht nach 4 Grad inkubiert. Am nächsten Tag wurden die Abschnitte mit PBS gewaschen, luftgetrocknet und 30 Minuten lang mit biotinmarkiertem Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG inkubiert. Die Schnitte wurden mit PBS gewaschen und 10 Minuten lang mit dem dAB -chromogenen Reagenz inkubiert, gefolgt von PBS -Spülung, Hämatoxylinfärbung für 3 Minuten, Differenzierung mit Salzsäure -Ethanollösung, Lithiumcarbonatblau, Dehydratisierung mit Gradientenethanol, mit Xyle und Versiegelung mit neutralem Gum.
Für jede Ratte wurden zwei zufällige 4 0 0 × Felder von Nierenabschnitten ausgewählt. Eine positive Färbung (braun-gelb) wurde analysiert, und die integrierte optische Dichte (IOD) jedes Feldes wurde unter Verwendung von Image-Pro Plus 6.0 für die statistische Analyse gemessen.
