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Mi Young Ahn1*, Ban Ji Kim1, Ha Jeong Kim1, Jae Sam Hwang1, Yi-Sook Jung2 und Kun-Koo Park3

Cistanche hat eine Anti-Aging-Wirkung

Abstrakt

Hintergrund: Ziel dieser Studie war es, dieAntialterungWirkung einer neu hergestellten, von Insekten stammenden Verbindung, Mistkäfer-Glykosaminoglykan (GAG), die alten SD-Ratten als Teil ihrer Ernährung für 1 Monat intraperitoneal verabreicht wurde. Es wurde festgestellt, dass die Verabreichung von Insekten-GAG mit einer Verringerung des oxidativen Schadens, der hepatozellulären Biomarkerspiegel, des Proteincarbonylgehalts und der Malondialdehydkonzentration zusammenhängt. DasAntialterung-bezogenen molekulargenetischen Mechanismen des Mistkäfer-GAG sind noch nicht vollständig aufgeklärt.

Ergebnisse: Catharsius molossus (eine Mistkäferart) besaß GAG (CaG).AntialterungAktivitäten; es reduzierte den Serumspiegel von Kreatininkinase, hatte aortavasorelaxierende Aktivitäten und kardioprotektive Wirkungen und hielt bei behandelten Ratten einen normalen Glukosespiegel aufrecht. Die Microarray-Analyse wurde mit einem Ratten-30-K-cDNA-Klonsatz-Array durchgeführt, um die Genexpressionsprofile von 14- Monate alten SD-Ratten zu identifizieren, die mit Mistkäfer-Glykosaminoglykan 5 mg/kg (CaG5) über einen 1- behandelt wurden. Monat Zeitraum, der getan wurde, um seine zu untersuchenAntialterungWirkung im Vergleich zu Bombus ignitus (einer Hummelart), Queen GAG 5 mg/kg (IQG5) oder Chondroitinsulfat 10 mg/kg. CaG5 und IQG5 hatten deutliche entzündungshemmende Wirkungen und führten zu einer Hemmung der Werte für freie Fettsäuren, Harnsäure, sGPT, IL-1 beta und CK. Darüber hinaus wurden gerinnungshemmende und antithrombotische Wirkungen beobachtet: Die Konzentration von Faktor 1 (Fibrinogen) war in CaG-behandeltem Rattenplasma erhöht. Die CaG5--behandelte Rattengruppe zeigte im Vergleich zur Kontrollgruppe eine Hochregulierung von 131 Genen, einschließlich Lipocalin 2 (Lbp) und einem Serin-Peptidase-Inhibitor, Kaszal Typ 3 (Spink3), sowie 64 herunterregulierte Gene, einschließlich Lysyloxidase (Lox ), Serin-Dehydratase (sds) und Retinolsaturase (Retsat).

Schlussfolgerung: Unsere Daten legen nahe, dass Mistkäfer-Glykosaminoglykan eine hilfreiche Behandlung für gealterte Ratten sein kann, was auf sein Potenzial als therapeutisches Biomaterial für das Altern hinweist.

Schlüsselwörter: Anti-Aging-Effekt, Mistkäfer (Catharsius molossus), Queen of B. ignitus, Glycosaminoglycan

Hintergrund

durch Reinigung, Extraktion und Identifizierung potenter Wirkstoffe als funktionelle Lebensmittel oder Medikamente eingesetzt werden. Extrakte des in China vorkommenden Mistkäfers Catharsius molossus zeigten eine ausgeprägte fibrinolytische Aktivität sowie antioxidative und antihyperglykämische Wirkungen an Ratten, die eine fettreiche Ernährung erhielten [9, 10]. Der Protein-Carbonyl-Gehalt im Blut und die Malondialdehyd-Konzentration im Lebergewebe, das über einen Zeitraum von 1- Monaten mit Mistkäfer-Ethanol oder Aceton-Extrakt behandelt wurde, war im Vergleich zu den Kontrollen signifikant erniedrigt [10]. Kürzlich wurde festgestellt, dass ein Peptid des koreanischen Mistkäfers, LLCIALRKK-NH2, ein 9-mer-Peptid, das von Copris tripartitus Coprisin abgeleitet ist, eine bakterizide Aktivität gegen E. coli und eine antimikrobielle Aktivität ausübt, indem es schwere DNA-Schäden verursacht , der einen apoptoseähnlichen Tod induziert [11]. Ein Imkereiprodukt, B. ignitus queen (BIQ) Alkoholextrakt, hat die höchste potenzielle Wirksamkeit unter allen Hummelextrakten, die zur Behandlung von Entzündungen bei SD-Ratten getestet wurden, da es das Pfotenödem signifikant reduzierte [12]. Also haben wir GAGs hergestellt, die von der größten verfügbaren Anzahl von C. molossus- oder B. ignitus-Königinnen stammen, um sie zu testenAntialterungEigenschaften. Das Altern beinhaltet einen fortschreitenden Rückgang der physiologischen Kapazität eines Organismus und manifestiert sich durch akkumulierte Veränderungen und Destabilisierung auf der Ebene des gesamten Systems [13]. Das Altern ist auch mit einem unterschiedlichen Genexpressionsmuster verbunden, das auf eine verringerte Stressreaktion zwischen metabolischen und biosynthetischen Genen hinweist [14]. Insbesondere eine alters- oder übergewichtsbedingte Zunahme des viszeralen Fettgewebes geht meist mit einer geringgradigen chronischen Entzündung einher, die als Ursache für verschiedene Stoffwechselerkrankungen wie Krebs, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und vor allem Typus postuliert wird zwei Diabetes [15]. Diese Insekten-GAGs können in einem sich schnell entwickelnden Gebiet mit der Aussicht auf die Nutzung von Gewebezüchtung und Biomaterialien als neuartige Therapien eingesetzt werden [16].

In dieser Studie berichten wir, dass GAG von Mistkäfern und BIQ angezeigt werdenAntialterungEigenschaften und daher sind diese Verbindungen vielversprechend für die Verwendung alsAntialterungAgenten. Außerdem demonstrieren wir den potenziellen Wert des C.-molossus-Dungkäfer-Glykosaminoglykans bei der Verringerung der schädlichen Aspekte des Alterns, gemessen sowohl im Serum als auch in den Genexpressionsmustern von 14- Monate alten SD-Ratten nach 1-monatiger Behandlung.

Methoden

Materialien

Zubereitung von Insektenglycosaminoglycan

Getrockneter C. molossus wurde auf einem lokalen Markt in China gekauft; Hummel (Königin von Bombus ignitus) wurde im Department of Agricultural Biology, National Academy of Agricultural Science, Südkorea, gezüchtet und gefriergetrocknet. Chondroitinsulfat und alle Reagenzien wurden von Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) geliefert.

Jedes getrocknete Insekt von einem Kilogramm (1 kg) wurde eingeweicht und dreimal mit Ethanol durch Ultraschall (Branson, Colorado, MI, USA) für 30 min extrahiert. Die von den Alkoholextrakten abgetrennten Rückstände wurden zweimal mit 2 Volumina Aceton entfettet. Ungefähr 200 g getrocknetes, entfettetes und pulverisiertes Pulver wurden in 2 l 0,05 M Natriumcarbonatpuffer (pH 9) suspendiert. Die Suspension wurde nach Zugabe von 28 ml (1,4 Prozent) Alcalase (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) 48 h bei 60 Grad inkubiert. Das Aufschlussgemisch wurde auf 4 Grad gekühlt und Trichloressigsäure wurde bis zu einer Endkonzentration von 5 % zugegeben . Die Probe wurde gemischt, 1 h stehen gelassen und dann 30 min bei 8000 × g zentrifugiert (Hanil Science Industrial, Incheon, Südkorea). Drei Volumina 5 % Kaliumacetat in Ethanol wurden zu einem Volumen Überstand gegeben. Nach dem Mischen wurde die Suspension über Nacht bei 4 Grad gelagert und dann zentrifugiert. Der Niederschlag in Höhe von 20 g wurde in 40 ml 0,2 M NaCl gelöst und zentrifugiert. Cetylpyridiniumchlorid (5 Prozent) wurde bis zum 0,2-fachen Volumen des Überstands zugegeben, und der Niederschlag wurde durch Zentrifugation gesammelt. Der Niederschlag wurde in 20 ml 2,5 M NaCl gelöst. Fünf Volumina Ethanol wurden zugegeben und der Niederschlag wurde durch Zentrifugation abgetrennt. Der Niederschlag wurde in Wasser gelöst und gegen 100 Volumina Wasser dialysiert [17], und das dialysierte rohe Glycosaminoglycan wurde gefriergetrocknet, um etwa 1,1 g CaG, 4,89 g IQG als Pulver zu erhalten. Rohes GAG wurde auf eine DEAE-Sephadex-A-25-Gelchromatographiesäule (40 x 1,2 cm) geladen, die mit 50 mM Phosphatpuffer (pH 7,4) äquilibriert war. Die Fraktionen wurden unter Verwendung eines linearen Natriumchloridgradienten von 0 bis 2,5 M NaCl in Phosphatpuffer bei einer Flussrate von 20 ml/h eluiert, und das dialysierte Glykan wurde zu reinem GAG gefriergetrocknet.

Tiere

Sprague Dawley (SD)-Ratten (männlich) im Alter von 8- Monaten wurden von Samtako Co. Ltd. (Osan, Korea) geliefert. Alle Verfahren entsprachen den NIH-Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren. Alle Experimente wurden von der Ethikkommission für Labortiere der National Academy of Agricultural Science, RDA, Südkorea (NAAS1503) genehmigt und folgten den nationalen Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Tieren (Einzelhaltung). Die Ratten wurden 6 Monate lang unter normalen Haltungsbedingungen (23 ± 2 °C, 55 ± 10 % Luftfeuchtigkeit und 12 Stunden Hell/Dunkel-Zyklus) akklimatisiert und mit einer normalen Diät gefüttert (D10001, AIN-76A rodent diet, Research Diet Inc., New Brunswick, NJ, USA) und Wasser ad libitum. Die 14- Monate alten Ratten wurden in 4 Behandlungsgruppen zu je 10 Ratten aufgeteilt und entsprechend der Gewichtsähnlichkeit (680,2 ± 9,20 g) verteilt. Die Behandlungen wurden täglich in PBS gegeben und jeweils intraperitoneal verabreicht.

Den Gruppen wurde eine Kontrollgruppe mit 5 mg/kg CaG (CaG5), 5 mg/kg IQG (IQG5) und 10 mg/kg CS (CS10) (Sigma Aldrich Co., USA) verabreicht. Jede Gruppe wurde 1 Monat lang auf der normalen Diät (AIN-76A Nagetierdiät, Forschungsdiät) und Probenbehandlung gehalten (Schema 1).

Fettgewebegewichte

Das Bauch- und Nebenhodenfett-zu-Körpergewicht-Verhältnis wurde bestimmt. Die Messungen erfolgten nach der Opferung am Ende der Behandlungsdauer von 1- Monaten.

Adipozytendichte

Die herausgeschnittenen Organe und das Fettgewebe wurden mit 10 % neutralem Formalin fixiert. Nach Einbettung in Paraffin wurden sie mit Hämatoxylin und Eosin und Toluidinblau O angefärbt, lichtmikroskopisch (Leica CTR6000, Hessen, Deutschland) untersucht und fotografiert. Die Adipozytendichte (Zellen/mm²) wurde in behandeltem und Kontrollgewebe durch Färbung mit Toluidinblau O (ursprüngliche Vergrößerung x400) bestimmt.

Blutentnahme und Blut, Plasma, ein Serumtest

Bei vier Gruppen namens CON, CaG5, IQG5, CS10 (n =10) wurde nach 1-monatiger Behandlung Blut (~5 ml) aus der hinteren Hohlvene unter leichter CO2-Inhalation entnommen und für Messungen der Serumchemie verwendet. Die untersuchten Parameter umfassten Phospholipid, Hyaluronsäure, freie Fettsäuren, Albumin, alkalische Phosphatase (ALP), Glutaminsäure-Oxalessigsäure-Transaminase (GOT), Glutaminsäure-Pyruvat-Transaminase (GPT), Milchdehydrogenase (LDH), CK (Kreatinin-Phosphokinase), Glukose , Gesamtcholesterintriglycerid, HDL-Cholesterin, LDL-Cholesterin, Kreatinin, Blutharnstoffstickstoff (BUN), Gesamtprotein, Harnsäure und c-reaktives Protein (CRP). Alle Parameter wurden unter Verwendung eines Autoanalyzers (Hitachi 7060 Automatic Clinical Analyzer, Tokyo) ausgewertet.

Blutentnahme und Plasmatest zum Nachweis der Antikoagulansaktivität

Nach den 1--monatigen Behandlungen wurden etwa 4 ml Plasma aus der hinteren Hohlvene unter leichter CO2-Inhalation entnommen und zentrifugiert. Der Überstand wurde für die Gerinnungszeit als antikoagulatorischer Aktivitätstest verwendet: aktivierte partielle Thromboplastinzeit (APTT), Thrombinzeit, Prothrombinzeit und Faktor 1 (Fibrinogen) als fibrinolytischer Aktivitätsassay unter Verwendung des zuvor erwähnten automatischen klinischen Analysegeräts gemäß dem Handbuch von Green Cross Lab.

Oxidative Lipidschädigung

Zur Bestimmung der oxidativen Lipidschädigung in Rattenhepatozyten wurden Malondialdehyd (MDA)-Spiegel mit einem Lipidperoxidationsassay unter Verwendung der Farbmethode mit Thiobarbitursäure-reaktiven Substanzen (TBARS) bei 535 nm gemessen [18].

Oxidativer Proteinschaden

Leberhomogenat-Überstände und Blut, die nach der Zentrifugation erhalten wurden, wurden zur Bestimmung des Carbonylgehalts verwendet. Oxidativer Proteinstress wurde durch Messen des Proteincarbonylgehalts im Blut bewertet. Der Carbonylgehalt wurde mit einem enzymgebundenen Immunoassay gemäß dem Protokoll des Herstellers für das OxiSelect™-Proteincarbonyl-ELISA-Kit (Cell Biolabs, Inc., San Diego, CA, USA) bestimmt. Die CAT-Aktivität (U/mg Protein) wurde basierend auf der CAT-vermittelten Zersetzung von H2O2 gemessen [19].

Leberhomogenatpräparat zum oxidativen Enzymnachweis

Etwa vier Gruppen namens CON, CaG5, IQG5, CS10, Lebergewebe wurden auf Eis in einer 10--fachen Volumen Lysepuffer PRO-PREP™ Proteinextraktionslösung (iNtRON, Busan, Korea) homogenisiert. Der Überstand des Leberhomogenats nach Zentrifugation (800 g, 10 min) wurde auf Katalase, Glutathionperoxidase, Glutathion-s-Transferase und Superoxid untersucht

Dismutase-Aktivität gemäß Assay-Handbuch (OxiSelect TM ELISA-Kit, Cell BioLabs, InC., San Diego, CA, USA).

Zytokin-IL-1-, IL-6- und IL-10-Assay

Bei vier Gruppen namens CON, CaG5, IQG5, CS10 wurde der IL- 1- oder IL-6- oder IL-10-Spiegel in mit Insekten-GAG behandeltem Rattenserum unter Verwendung von kommerziellen Elisa-Kits (Quantikine, R&D Systems, Inc , Minneapolis, MN, USA) gemäß Herstellerangaben.

RNA-Präparation und quantitative Echtzeit-PCR-Analyse

Gesamt-RNA wurde aus der Leber unter Verwendung von TRIzol-Reagenz (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) isoliert, und RNA-Konzentration und -Reinheit wurden unter Verwendung eines UV/Vis-Spektrophotometers (Beckman Coulter Co., Miami, FL, USA) gemessen. Komplementäre DNA (cDNA) wurde aus 1 g Gesamt-RNA unter Verwendung des cDNA Reverse Transcription Kit mit hoher Kapazität (Amersham Biosciences Co., Piscataway, NJ, USA) synthetisiert. Amplifikation durch Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) wurde mit Power SYBR Green Master Mix unter Verwendung eines 7500 Real-Time PCR-Systems (beide von Applied Biosystems) gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Für den Nachweis von Zielgentranskripten haben wir mithilfe der Beacon Designer-Software (PREMIER Biosoft, Palo Alto, CA, USA) spezifische Forward- und Reverse-Oligonukleotid-Primer entwickelt. Die Primersequenzen sind in Schema 2 aufgeführt. Ziel-mRNA-Spiegel wurden unter Verwendung von Glyceraldehyd-3--Phosphatdehydrogenase (GAPDH) als interne Kontrolle normalisiert, um die relative Expression von Ziel-mRNA gemäß dem Cycling-Threshold-Verfahren zu qualifizieren. Alle Proben wurden dreifach analysiert.

Primersequenzen für die Amplifikation von Genen, die am Zellreparaturmechanismus beteiligt sind, und interner GAPDH-Standard (Schema 2).

DNA-Microarray-Verfahren

Nach histopathologischer Analyse wurde eine Microarray-Hybridisierung an Leberproben durchgeführt [20]. Gesamt-RNA wurde aus Lebergewebe unter Verwendung eines Qiagen RNeasy Midi Kits (Qiagen, Valencia, CA, USA) isoliert. Ein FairPlay™-Mikroarray-Markierungskit (Stratagene, La Jolla, CA, USA) wurde gemäß den Anweisungen des Herstellers verwendet. Die markierte DNA wurde auf einen Microarray-Chip geladen. Eine Hybridisierungskammer wurde mit dem Mikroarray-Chip Rat Genome 230 2.0 Array (Affymetrix Inc., Santa Clara, USA) zusammengebaut und über Nacht bei 60 Grad in ein Wasserbad getaucht. Der Microarray-Chip wurde in Waschpuffer I, Waschpuffer II und dann Waschpuffer III für 5 oder 15 min gewaschen. Der Objektträger wurde durch 15-minütiges Zentrifugieren bei 500 g getrocknet und mit einem BMS Array Scanner, einem angewandten Präzisions-Array Worx eBiochip Reader (BioRad, Dallas, TX, USA), unter Verwendung der Cy3- und Cy5-Kanäle gescannt [21].

Isolierte Rattenherzanalyse

Männliche Sprague-Dawley-Ratten mit einem Gewicht von 350 ± 50 g wurden mit Pentobarbital (100 mg/kg) anästhesiert. In die Schwanzvene wurde Heparin (1000 U/kg) injiziert und dann wurde die Trachea intubiert. Während Ratten mit einem Nagetierbeatmungsgerät (Modell 7025; Ugo Basile, Comerio-Varese, Italien) mechanisch beatmet wurden, wurden ihre Herzen in situ mit sauerstoffhaltigem, modifiziertem Krebs-Henseleit-Bicarbonatpuffer durch retrograde Aortenkanülierung perfundiert. Die Herzen wurden dann herausgeschnitten und in einen Langendorff-Apparat (Hugo Sachs Electronic, March-Hugstetten, Deutschland) überführt, wo sie mit sauerstoffhaltigem, modifiziertem Krebs-Henseleit-Bicarbonatpuffer bei einem konstanten Perfusionsdruck von 75 mmHg perfundiert wurden. Ein mit Wasser gefüllter Latex-Ventrikel wurde durch die Lungenvene eingeführt und mit einem Isotec-Druckwandler (Hugo Sachs Electronik) verbunden, um den linksventrikulären Druck (LVP) zu messen. Den Herzen wurde erlaubt, sich 15 Minuten lang zu äquilibrieren, zu diesem Zeitpunkt wurde der linksventrikuläre enddiastolische Druck (EDP) auf 10 mmHg eingestellt, und dieses Ballonvolumen wurde während des gesamten Experiments beibehalten. Dann Grundlinien-Kontraktionsfunktion, Herzfrequenz und Koronarfluss (extrakorporale elektromagnetische Flusssonde; Narco Bio-systems, Houston,

TX, USA) gemessen. Die kardiale Kontraktionsfunktion wurde berechnet, indem der LVEDP vom LV-Spitzensystolendruck (LVSP) subtrahiert wurde, was den entwickelten Druck (LVDP) ergab. Nach einer 1-stündigen Äquilibrierung wurden die Aortenringe mit Vehikel (Kochsalzlösung) oder CaG (1 0 ug/ml, 100 ug/ml) 10 min behandelt, bevor die Kontraktion durch 1 μM Phenylephrin induziert wurde. Dann wurde eine endothelabhängige Relaxation durch Acetylcholin (0,1–100 μM) induziert [22].

Statistische Analyse

Die Mittelwerte und Standardfehler aller untersuchten Parameter wurden für jede Gruppe unter Verwendung des ANOVA-Tests bestimmt. Ein Student's t-Test wurde durchgeführt, um signifikante Unterschiede zwischen Kontroll- und behandelten Gruppen zu bestimmen. Ein p-Wert<0.05 was="" considered="">

Ergebnisse

Körpergewicht und Fettveränderungen

Es gab keine signifikanten Unterschiede im mittleren Körpergewicht zwischen den Behandlungsgruppen (Abb. 1). Während des 1--monatigen Verabreichungszeitraums waren die Körpergewichte der gealterten männlichen Ratten in der Kontroll- und der CaG-, IQG- und CS-behandelten Gruppe vergleichbar. Die mittleren wöchentlichen Körpergewichte sind in Abb. 2a dargestellt: CON, 685,16 ± 9,14 g; CaG5, 659,54 ± 14,21 g; IQG5, 646,5 0 ± 11,56 g und CS1 0, 662,93 ± 7,82 g. Die mittlere Bauchfettmenge war in den IQG5- und CS10-Gruppen im Vergleich zur Kontrolle signifikant verringert: 21,84 ± 7,46 g für die Kontrolle; 20,66 ± 8,47 g für CaG5; 16,56 ± 5,97 g für IQG5 (IQG5 vs. KON, p < 0,05);="" und="" 16,93="" ±="" 5,17="" g="" für="" cs10="" (cs10="" vs.="" con,="" p="">< 0,05)="" (abb.="" 2a).="" nebenhodenfett="" war="" in="" den="" iqg5-="" und="" cs10-gruppen="" im="" vergleich="" zur="" kontrolle="" ebenfalls="" signifikant="" verringert:="" 10,38="" ±="" 2,58="" g="" für="" die="" kontrolle;="" 8,19="" ±="" 4,00="" g="" für="" cag5;="" 7.00="" ±="" 1,35="" g="" für="">

(IQG5 vs. CON, p < 0.05);="" und="" 8,56="" ±="" 2,53="" g="" für="" cs10="" (cs10="" vs.="" con,="" p="">< 0,05)="" (abb.="">

Adipozytendichte

Die Adipozytendichte [Anzahl Zellen/Fläche (mm2)] von Rattenlebergeweben, die mit GAG in einem HFD behandelt wurden, wie durch Toluidinblau-O-Färbung bestimmt, wurde durch CaG5 (33,00 ± 1,73), IQG5 (45,0) reduziert .00 ± 4,36) oder CS10 (26,00 ± 2,52) (CS10 vs. KON, p < 0,05) im Vergleich zur Kontrolle (51,00 ± 5,29) (Abb. 2b).

Veränderungen des Blutdrucks und der Herzfrequenz

Es wurden keine signifikanten Unterschiede im Blutdruck (systolischer Blutdruck oder Herzfrequenz) zwischen den mit 5 mg/kg CaG, IQG oder CS behandelten Gruppen und der Kontrollgruppe beobachtet (Daten nicht gezeigt).

Hämatologie und Blutchemie

Zwischen den Behandlungs- und Kontrollgruppen wurden einige dosisabhängige Änderungen in Bezug auf die am Ende des Experiments untersuchten hämatologischen Parameter beobachtet. Es gab einen 27,5-prozentigen Anstieg der APTT (sek.) in der CaG5--behandelten Gruppe: CON, 35,68 ± 5,68; CaG5, 45,49 ± 10,91; IQG5, 29,93 ± 3,57; CS10, 36,83 ± 23,95 (Abb. 3). Die Thrombinzeit (Sek.) war wie folgt: CON, 40,18 ± 2,04; CaG5, 42,13 ± 3,23; IQG5, 36,15 ± 6,67; CS10, 45,02 ± 21,89. Es gab einen signifikanten (62,6 Prozent) Anstieg von Faktor I (Fibrinogen, mg/dL) in der CaG5--behandelten Gruppe: CON, 429,33 ± 142,22; CaG5, 698,29 ± 120,28 (CaG5 vs. CON, p < 0,05);="" iqg5,="" 627,14="" ±="" 160,67;="" cs10,="" 790.00="" ±="" 274,22="" (cs10="" vs.="" kon,="" p="">< 0,05).="" die="" prothrombinzeit="" (sek.)="" war="" wie="" folgt:="" con,="" 62,86="" ±="" 47,30;="" cag5,="" 52,71="" ±="" 4,96;="" iqg5,="" 52,14="" ±="" 5,58;="" cs10,="" 55.00="" ±="">

Biochemie des Serums

In Seren aus den mit IQG und CS behandelten Gruppen (Tabelle 1) waren die Phospholipidspiegel (mg/dl) nach 1 Monat bei gealterten Ratten signifikant niedriger als in Kontrollseren: CON, 271,78 ± 91,74; CaG5, 233,67 ± 71. 0; IQG5, 173,2 ± 32,{{20}}2 (IQG5 vs. KON, p < 0,05);="" cs10,="" 259,7="" ±="" 57,27="" (cs10="" vs.="" kon,="" p="">< 0,05).="" die="" spiegel="" freier="" fettsäuren="" (μeq/l)="" waren="" verringert:="" kon,="" 686,78="" ±="" 104,67;="" cag5,="" 431,33="" ±="" 66,22="" (cag5="" vs.="" con,="" p="">< 0,05);="" iqg5,="" 405,6="" ±="" 63,39="" (iqg5="" vs.="" kon,=""><0.05); cs10,="" 566.9="" ±="" 115.38="" (cs10="" vs.="" con,="" p=""><0.05). also,="" serum="" gpt="" (alt)="" levels="" (iu/l)="" in="" the="" cag-="" and="" iqg-="" treated="" groups="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" control="" group="" in="" aged="" rats:="" con,="" 76.33="" ±="" 40.21;="" cag5,="" 36.78="" ±="" 8.0="" iu/l;="" iqg5,="" 43.22="" ±="" 13.86="" (iqg5="" vs.="" con,p="" <="" 0.05);="" cs10,="" 53.44="" ±="" 11.36="" (cs10="" vs.="" con,="" p=""><0.05). fur-="" thermore,="" the="" mean="" creatinine="" phosphokinase="" (ck="" u/l)="" level="" in="" the="" cag-treated="" group="" was="" lower="" than="" that="" in="">

Kontrollgruppe bei gealterten Ratten: CON, 125,78 ± 91,66; CaG5, 1{{10}}2,89 ± 65,73 (CaG5 vs. CON, p < 0,05);="" iqg5,="" 91,22="" ±="" 24,74;="" cs10,="" 131,2="" ±="" 62,56.="" die="" mittlere="" serumglukose="" (mg/dl)="" war="" bei="" gealterten="" ratten="" signifikant="" verringert="" (jede="" gruppe="" vs.="" kon,="" p="">< 0,05):="" kon,="" 435,11="" ±="" 105,42;="" cag5,="" 304,0="" ±="" 44,44;="" iqg5,="" 275,9="" ±="" 43,18;="" cs10,="" 317,8="" ±="">

Der mittlere Gesamtcholesterinspiegel (mg/dl) in der mit IQG behandelten Gruppe war bei gealterten Ratten niedriger als in der Kontrollgruppe, und dieser Unterschied war ebenfalls signifikant: CON, 212,67 ± 92,82; CaG5, 181,44 ± 68,4; IQG5, 124,1 ± 23,6 (IQG5 vs. KON, p < 0,05);="" cs10,="" 198,9="" ±="">

Darüber hinaus waren die Triglyceridspiegel (mg/dL) wie folgt: CON, 207,89 ± 101,95; CaG5, 136,22 ± 61,6; IQG5, 103,3 ± 35,59 (IQG5 vs. KON, p < 0.05);="" cs10,="" 183,4="" ±="" 104,74.="" ldl-cholesterinspiegel="" (mg/dl)="" verringert:="" kon,="" 74,67="" ±="" 44,91;="" cag5,="" 69,0="" ±="" 31,3;="" iqg5,="" 41,44="" ±="" 10,14="" (iqg5="" vs.="" kon,="" p="">< 0,05);="" cs10,="" 65,22="" ±="" 18,52.="" signifikante="" abnahmen="" des="" harnsäurespiegels="" (mg/dl)="" wurden="" in="" allen="" gag-behandelten="" gruppen="" im="" vergleich="" zur="" kontrollgruppe="" beobachtet="" (jede="" gruppe="" vs.="" kon,="" p="">< 0,05):="" kon,="" 10,9="" ±="" 2,26;="" cag5,="" 8,12="" ±="" 1,48;="" iqg5,="" 6,49="" ±="" 0,89;="" cs10,="" 8,14="" ±="" 2,17,="" tabelle="">

Verringerung oxidativer Schäden

Malondialdehyd (MDA, nmol/ml) wurde nach 1 Monat jeder GAG-Behandlung bestimmt [CON, 252,9 ± 13,1; CaG5, 175,1 ± 5,8 (30,32 Prozent Abnahmen). Jede Behandlung mit GAG und Chondroitinsulfat verringerte die Lipidperoxidation in Hepatozyten (Abb. 4a). Die Protein-Carbonyl-Konzentration im Blut war in einem Verhältnis von 68,52 Prozent, 36,89 Prozent und 53,70 Prozent in GaG5, IQG5 bzw. CS10 verringert (Abb. 4b). Aber jedes GAG hatte keine statistischen Unterschiede verglichen mit der Kontrolle im Hepatozyten-Carbonylgehalt (Daten nicht gezeigt).

Quantifizierung des oxidativen Enzyms (Katalase, GPx, GST, SOD).

Katalase-Aktivität (mg Protein/min) in Hepatozyten nach 1 Monat GAG-Behandlung war wie folgt: CON, 17,72 ± 2,81; CaG5, 19,87 ± 3,88; IQG5, 17,22 ± 4,55; CS10, 19,23 ± 3,55. Die Katalase-Aktivität nahm in allen CaG-behandelten Hepatozytengruppen zu. Superoxid-Dismutase (SOD) ist ein Enzym, das freie Radikale (Superoxid) fängt. Die SOD-Aktivität (nmol/min/ml) stieg in den Behandlungsgruppen im Vergleich zur Kontrolle an: Kontrolle 381,44 ± 85,32; CaG5, 400,56 ± 60,62; IQG5, 386,72 ± 69,22; CS10, 513,05 ± 60,07. Die Glutathionperoxidase-Aktivität (Einheit/mg Protein) in der CaG-behandelten Hepatozytengruppe war durch die Behandlung signifikant erhöht (CaG5 vs. CON, p < 0,05)="" und="" die="" glutathion-s-transferase-aktivität="" (nmol/min/ml)="" in="" der="" die="" cag-gruppe="" war="" im="" vergleich="" zur="" kontrollgruppe="" ebenfalls="" signifikant="" erhöht="" (cag5="" vs.="" con,="" p="">< 0,05)="" (tabelle="">

Zytokin-IL-1- und IL-10-Produktion

Anstiege der IL-10-Spiegel wurden in der CaG-behandelten Gruppe beobachtet. IL-1 (ρg/ml)-Spiegel im Serum wurden um 1 reduziert

Tabelle 1 Serologische Befunde von gealterten Ratten, die 1 Monat lang mit CaG oder IQG behandelt wurden

Monat CaG- oder IQG-Behandlung, was die entzündungshemmenden Wirkungen der Verbindungen zeigt: Kontrolle, 251,3 ± 70,7; CaG5, 102,9 ± 9,5; IQG5, 110,4 ± 5,2; CS10, 110,4 ± 10,1 (jede Gruppe vs. KON, p < 0,05).="" il-10-aktivität="" (ρg/ml)="" nach="" 1="" monat="" cag-behandlung="" bei="" ratten="" war="" erhöht:="" con,="" 34,9="" ±="" 11,5;="" cag5,="" 67,4="" ±="" 13,3="" (cag5="" vs.="" con,=""><0.05); iqg5,="" 55.5="" ±="" 24.7;="" cs10,="" 28.0="" ±="" 3.8="" (fig.="" 5).="" the="" il-10="" levels="" in="" the="" cs10="" group,="" was="" statistically="" different="" from="" that="" in="" the="" con="" group="" (cs10="" vs.="" con,p=""><>

Genexpression durch quantitative Echtzeit-PCR-Analyse

The data represented that PCR cycle required number (Ct value) when the concentration of PCR amplicon are equilibrated by sample amplicon. Median CT values of 5 sample's represented, but there was no difference from the control group (Ct vale >2.0) auf verwendeter Primersequenz (Daten nicht gezeigt).

DNA-Mikroarray

Eine Microarray-Analyse unter Verwendung eines Maus-28-K-cDNA-Klon-Arrays wurde durchgeführt, um die Genexpressionsprofile in CaG-, IQG- und CS-behandelten 15- Monate alten SD-Rattenlebern zu identifizieren und Informationen über das Potenzial bereitzustellenAntialterungMarkierungen.

Im Vergleich zur Kontrollgruppe zeigte die CaG5-Gruppe eine 2-- bis 4--fache Zunahme bei 118 Genen, eine 4- 8--fache Zunahme bei 11 Genen und eine mehr als 8--fache Zunahme Zunahme von 2 Genen. Die Expressionsniveaus der verbleibenden ~30 000-Gene blieben gleich. Sechzig Gene wurden vom 2-- auf das 4--fache herunterreguliert, und 4 zeigten eine 4-- bis 8--fache Abnahme.

In der IQG5-Gruppe erhöhten sich im Vergleich zur Kontrollgruppe 162 Gene um das 2-- bis 4--Fache, 10 Gene um das 4-- bis 8--Fache und 3 Gene um das 4-- bis 8--Fache mehr als 8--fach. Andererseits wurden 66 um das 2-- bis 4--Fache herunterreguliert und 7 um das 4-- bis 8--Fache reduziert.

Tabelle 2 Antioxidative Enzymaktivitäten von Mistkäfer-Glycosaminoglycan in gealterter Rattenleber

In der CS10-Gruppe waren im Vergleich zur Kontrollgruppe 63 Gene um das 2-- bis 4--fache hochreguliert, 2 Gene um das 4-- bis 8--fache erhöht und 2 Gene waren hochreguliert um mehr als das 8--fache. Achtunddreißig Gene wurden um das 2-- bis 4--Fache herunterreguliert, 4 wurden um das 4-- bis 8--Fache herunterreguliert und 4 verringerten sich um mehr als das 8--Fache.

Im Vergleich zur Kontrollgruppe war das Lipocalin2 (Lcn2)-Gen um etwa das 10--Fache in CaG5--behandeltem Lebergewebe, 46--fach in der IQ5-Gruppe und {{6} erhöht. }Fold in der CS10-Gruppe. In Lebergeweben von CaG5--behandelten Mäusen wurde die Lysiloxidase (Lox) in einem Verhältnis von 0,13 herunterreguliert, d. h. die Genexpression war verringert. Die mit CaG5 behandelte Rattengruppe zeigte im Vergleich zur Kontrollgruppe, dass 131 Gene, einschließlich Lipocalin 2, Oligosaccharid-Bindungsprotein (Lbp) und Serinpeptidase-Inhibitor, Kaszal Typ 3 (Spink3), hochreguliert waren (Tabelle 3) und 64 Gene, einschließlich Lysyloxidase (Lox), Serin-Dehydratase (sds) und gesättigtes Retinol (Retreat) wurden herunterreguliert (Tabelle 4). Die CaG5--behandelte Gruppe zeigte im Vergleich zur Kontrollgruppe eine Hochregulierung von 131 Genen, darunter Lipocalin 2, Oligosaccharid-bindendes Protein (Lbp) und den Serin-Peptidase-Inhibitor Kaszal Typ 3 (Spink3) (Tabelle 3 ) und Herunterregulierung von 64 Genen, einschließlich Lysyloxidase (Lox), Serin-Dehydratase (sds) und gesättigtem Retinol (Retsat) (Tabelle 4). Diese Daten weisen auf Lipocalin 2 und Adipokine als hochregulierte Gene und Lysyloxidase (verwandt mit Heparanase) als herunterreguliertes Gen als potenzielle therapeutische Marker hin, die gegen Alterung und Fettleibigkeit wirken

Charakterisierung von CaG

Die Zusammensetzungen der Amino-, sauren und neutralen Monosaccharide von GaG wurden durch GC-MS bestimmt (Tabelle 5). Die primären Aminomonosaccharide von CaG sind in der folgenden Reihenfolge: D-Glucosaminsäure > N-Acetylgalactosamin > N-Acetyl-D-gactosaminitol > Galactosamin-HCl > Galactosaminsäure > Galactosamin > Glucuronsäure. Außerdem sind die in CaG gefundenen neutralen Monosaccharide hauptsächlich - Glucose und Mannitol, während die kleineren Arabinose und Rhamnose enthalten sind.

Indikatoren der Kardioprotektion

In diesem Experiment charakterisierten wir die direkte Wirkung von CaG auf Widerstandsarterien unter Verwendung von Gefäßen, die in vitro mit Phenylephrin-induzierter Kontraktion und Acetylcholin-induzierter Entspannung inkubiert wurden. CaG wurde als kardioprotektives Mittel bewertet. Die Konzentrations-Antwort-Kurve auf CaG war im Vergleich zu der nach der Kontrollbehandlung (nur PBS) beobachteten nach unten verschoben, was zeigt, dass die Herzstimulation in einer konzentrationsabhängigen Weise stattfand ( 6 ).

Diskussion

Altern ist ein Prozess des fortschreitenden Rückgangs der physiologischen Leistungsfähigkeit eines Organismus, der sich durch kumulierte Veränderungen und Destabilisierung auf der Ebene des gesamten Systems manifestiert [13]. Es wird angenommen, dass Glykosaminoglykan die schädlichen Auswirkungen des Alterns verringert, indem es die Zerstörung von Knorpel, Knochen, Bandscheiben, Haut [23], dem Gefäßsystem [8] usw. verhindert. Kürzlich wurde eine Art von GAG als multifunktionales Material auf Heparinbasis oder Polyurethan eingesetzt gilt derzeit als eines der etablierten biokompatiblen und blutkompatiblen

Biomaterialien, die eine enorme Struktur-Eigenschafts-Beziehung bieten, wie z. B. eine Heparin-Immobilisierung auf Chitosan-modifizierten Polyurethan-Implantaten mit antiadhäsiven und antimikrobiellen Eigenschaften [24]. Heutzutage hat das Aufkommen der Temperaturkontrolle die Konstruktion von Insektenaufzuchtsystemen im großen Maßstab ermöglicht. Daher Glykosaminoglykan

kann aus der Insektenrinde als Alkoholextraktrückstand gewonnen werden. Solche rohen Medikamente aus Mistkäfern und B. ignitus-Königinnen wurden untersucht, um ihre aktiven Komponenten zu identifizieren oder die Extrakte für den menschlichen Gebrauch sicherer zu machen. Der Mistkäfer C. molossus wurde gereinigt, um N-Acetyl-Dopamin-Dimere, Molossusamid AC (1–3), zu ergeben

COX-1- und COX-2-Inhibitoraktivität [25]; Chitosan [26]; Melanin [27]; und Serinproteasen [9, 28]. Es wurde gezeigt, dass ein Hummelextrakt (Bombus ignitus) Bienengift-Serinprotease [29], Peroxiredoxine [30] und Peptidoglykan-Erkennungsprotein (PGRP-S) [31] enthält.

Zu den Strategien zur Verhinderung oder Verzögerung des Alterns gehörten die Einnahme von Antioxidantien zur Reparatur oxidativer Zellschäden an DNA, Proteinen und Lipiden sowie die stammzellvermittelte Geweberegeneration und Gentherapie [32]. Als Marker für oxidativen Lipidschaden in oxidativen Hepatozyten-Lipidstresszuständen wurde Malondialdehyd durch CaG-Behandlung verringert. Auch der Carbonylgehalt im Blut, insbesondere der Neutrophilen, wurde durch die CAG-Behandlung verringert und zeigte eine Reparatur des zellulären oxidativen Proteinschadens.

Glykosaminoglykane aus C. molossus- und B. ignitus-Königinnen bestehen hauptsächlich aus D-Glucosaminsäure als saurem Monosaccharid und N-Acetylgalactosaminitol als Amino

Monosaccharid, zusammen mit -Glucose und D-Mannit als neutrale Monosaccharide. So kann die Verbindung auf Zellmembranrezeptoren zugreifen und durch Veränderung des Energiestoffwechsels den Ursachen altersbedingter Erkrankungen vorbeugen. Glykosaminoglykane könnten Bindegewebe [23], erodierten Knorpel, Bandscheiben, Knochen und Glykoproteine ​​auf molekularer Ebene reparieren, wobei GAG eine Bindung zwischen Proteinen eingeht [9]. In diesem Experiment waren die verwendeten Ratten alt und wogen etwa 680 g, so dass es nicht einfach gewesen wäre, eine Verringerung des Körpergewichts herbeizuführen, aber wir beobachteten eine Verringerung des Fettfettgewichts und der Adipozytenzahl. Wie bei den meisten Glykosaminoglykanen bewirkten CaG und IQG eine Verringerung der Serumspiegel entzündungsbezogener Parameter: freie Fettsäuren, AST (SGPT), Kreatininkinase (bezogene Herzfunktion), Glucose, Harnsäure und Hyperglykämie Werte: Cholesterin, Gesamt, Triglyzeride, LDL-Cholesterin usw. Die Werte der freien Fettsäuren (verwandte Fettleber) der behandelten Gruppen waren statistisch signifikant verringert, 36,7 Prozent in der CaG-Gruppe und 40,94 Prozent in der IQG-Gruppe. Auch der sGPT-Wert (bezogene Leberfunktion) war signifikant reduziert, 51,58 Prozent in der CaG-Gruppe und 43,38 Prozent in der IQG-Gruppe.

Daten, die aus der DNA-Microarray-Analyse generiert wurden, unterstützten diesAntialterungWirkung von IQG, mit bedeutsamen Veränderungen in den Genexpressionsprofilen bei 14- Monate alten SD-Ratten, die nach einer Behandlungsdauer von 1- Monaten beobachtet wurden. Die CaG5--behandelten Ratten zeigten im Vergleich zur Kontrollgruppe Anstiege bei 131 Genen, darunter Lipocalin 2 [33], Liposaccharid-bindendes Protein (Lbp) [34] und ein Serin-Peptidase-Inhibitor, Kazal Typ3 (Spink3) [35] und Abnahmen in 64 Genen, einschließlich Lysyloxidase (Lox) [36], Serin-Dehydratase (sds) [37] und Retinolsaturase (Retsat) [38]. Die Daten weisen auf Lipocalin 2 und Adipokine hin, die hochreguliert wurden, und auf Lysyloxidase (verwandt mit Heparanase), die herunterreguliert wurde, als potenzielle therapeutische Marker fürAntialterungWirkungen bei übergewichtigen Tieren.

Die vorliegende Studie beobachtete bedeutsame Veränderungen in den Genexpressionsprofilen bei gealterten Ratten nach einer einmonatigen Behandlung mit CaG oder IQG. Die Genexpression von Lipocalin-2, einem Adipokin, das an der Insulinresistenz beteiligt ist [39], und einem sekretorischen Protein mit lipidbindenden Eigenschaften, war etwa 10-fach erhöht. Dies stimmt mit einer Microarray-Studie überein, die berichtete, dass die Einnahme von Sojabohnen einen Anstieg eines endogenen Amyloid-Chaperons, der Prostaglandin-D2-Synthase vom Lipocalin-Typ (Ptgds), verursacht, was zu einer Unterdrückung von Amyloid- und kognitiver Dysfunktion führt [4{{ 22}}]. Das Lipopolysaccharid (LPS)-Bindungsprotein (LBP), ein Surrogatmarker der mikrobiellen Translokation, ist mit einer reduzierten körperlichen Funktion und einer erhöhten Entzündung verbunden [41]. Der normale Alterungsprozess verändert das Blutgerinnungssystem des Menschen; Natürliche Antikoagulantien, einschließlich Antithrombin III, Heparin-Cofaktor II, Protein C, Protein S und Tissue Factor Pathway Inhibitor, können die Reaktionen des Blutgerinnungssystems modulieren [42]. In dieser Studie gab es signifikante Anstiege von Faktor I (Fibrinogen) in den mit CaG (162,6 Prozent), IQG (146,0 Prozent) und CS10 (184,0 Prozent) behandelten Gruppen im Vergleich zur mit PBS behandelten Kontrollgruppe. Auch der LBP-Spiegel (LPS-Bindungsprotein) wurde in unseren DNA-Microarray-Daten hochreguliert, was darauf hindeutet, dass Heparin (GAG) an LBP bindet, den Transfer von LPS zu CD14 erleichtert und die LPS-vermittelte Aktivierung von Monozyten im peripheren Blut verstärkt, was zu gerinnungshemmende Aktivität [43]. Ein Trypsin-Inhibitor, der Serinprotease-Inhibitor Kazal-Typ 3 (Spink3), wurde in diesem Experiment hochreguliert, was auf eine Rolle der parakrinen Modulation hinweist; es ist auch an der Embryoimplantation beteiligt [44]. Da Spink3 ein wichtiger Serinprotease-Inhibitor ist, könnte seine Hochregulierung einen wichtigen endogenen zytoprotektiven Mechanismus widerspiegeln, der weitere Verletzungen verhindern würde [45]. Die Herunterregulierung der Lysyloxidase kann darauf hindeuten, dass Heparin (GAG), das die feste Bindung von Lysyloxidase an vorgeformte Fibrillen hemmt, kaum beeinflusst wurde [46]. Die in diesem Experiment beobachtete Herunterregulierung von Retinolsaturat ist bemerkenswert, da Retinolsaturase die Adipogenese fördert und bei Fettleibigkeit herunterreguliert wird [47]. Gemäß einer Hypothese, der Fettgewebsdichte, einem neuartigen Biomarker, der das Mortalitätsrisiko bei älteren Erwachsenen vorhersagt, das nicht entzündungsbedingt zu sein scheint [48], reduzierte CaG außerdem signifikant die Fettdichte, was eine starke Wirkung versprichtAntialterungAgent.

Schlussfolgerungen

Das Glycosaminoglycan des Mistkäfers senkte die Cholesterin- und Triglyceridspiegel im Serum, verursachte eine Gewichtsabnahme des Fettgewebes und eine Normalisierung der Serumspiegel von freien Fettsäuren, GPT, Glukose und Harnsäure sowie eine Verlängerung der Gerinnungszeit, die eine Blutaggregation und Lipidbildung verhindern würde Akkumulation in vaskulären endothelialen Barrieren, die zur Homöostase im Kreislaufsystem beitragen. IL{{0}} (pg/ml) im Serum wurde nach 1 Monat CaG- oder IQG-Behandlung reduziert, was eine entzündungshemmende Wirkung zeigt. Darüber hinaus war das Leberschutzgen Lipocalin stark (10--fach) hochreguliert und Lysyloxidase war herunterreguliert (0,1--fach) bei mit CaG behandelten Ratten. Von Insekten stammendes CaG könnte a

sicherer Ersatz für Heparin und andere GAGs aus Säugetierquellen, da Insektenquellen die Möglichkeit der Übertragung infektiöser Viren von Tieren wie Schweinen verringern. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass CaG und BIQ nicht nur natürlich sein könntenAntialterungWirkstoffe, sondern auch funktionelle Lebensmittel, ähnlich wie Chitosan und zukünftige Biomaterialien, die in unserem heutigen Alltag eine wichtige Rolle spielen.

Abkürzungen

ALP: Alkalische Phosphatase; ALT(GPT): Glutamat-Pyruvat-Transaminase; aPTT: aktivierte partielle Thromboplastinzeit; AST(GOT): Glutamat-Oxalacetat-Transaminase; BUN: Blut-Harnstoff-Stickstoff; CaG 5: Mistkäfer (Catharsius molossus) Glykosaminoglykan 5 mg/kg; CK: Creatinin-Phosphokinase; CON: Kontrollgruppe; CRP: C-reaktives Protein;

CS10: Chondroitinsulfat (10 mg/kg); GAG: Glykosaminoglykan; GGT: - Glutamyltransferase; H. Chol: Hoher Cholesterinspiegel; IQG5: Queen of Bombus ignitus (eine Hummelart) Glykosaminoglykan 5 mg/kg; l.Chol: niedriger Cholesterinspiegel; LDH: Laktatdehydrogenase; PT: Prothrombinzeit; T. Chol: Gesamtcholesterin; TG: Triglycerid

Danksagungen

Die Autoren danken der National Academy of Agricultural Science für finanzielle (RDA, PJ011853) und technische Unterstützung.

Finanzierung

Diese Arbeit wurde durch das Grundlagenforschungsprojekt der Verwaltung für ländliche Entwicklung, PJ011853, unterstützt.

Verfügbarkeit von Daten und Materialien

Alle Daten sind auf Zeitschriftenportalen im eingereichten Manuskript verfügbar. Neben dieser Einreichung werden keine weiteren unterstützenden Dateien/Daten benötigt.

Konkurrierende Interessen

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden Interessen haben.

Autorenbeiträge

MY führte die meisten Experimente durch, bereitete das Manuskript vor: konzipierte die Studie, beteiligte sich an Design und Koordination, sammelte und analysierte Daten und bereitete das Manuskript vor. BJ führte die Tierversuche durch und nahm an einem oxidativen Enzymtest teil. HJ führte Zytokin-Assays durch. JS war am genetischen Sequenzabgleich beteiligt. KK nahm am DNA-Microarray teil. YS führte eine In-vivo-Studie zur Reaktionsfähigkeit von Widerstandsarterien durch. Alle Autoren haben das endgültige Manuskript gelesen und genehmigt.

Zustimmung zur Veröffentlichung

Dieses Manuskript enthält in keiner Form Daten einer einzelnen Person.

Ethik-Zulassung

Studien mit Tieren wurden von der Ethikkommission für Labortiere der National Academy of Agricultural Science, RDA, Südkorea (NAAS1503) genehmigt.

Manuskripte, die über Studien berichteten, enthielten keine menschlichen Teilnehmer, menschliche Daten oder menschliches Gewebe.

Anmerkung des Herausgebers

Springer Nature bleibt neutral in Bezug auf Zuständigkeitsansprüche in veröffentlichten Karten und institutionellen Zugehörigkeiten.

Angaben zum Autor

1 Department of Agricultural Biology, National Academy of Agricultural Science, Rural Development Administration (RDA), Wanju-Gun 55365, Südkorea. 2College of Pharmacy, Ajou University, Suwon 442-749, Südkorea. 3Pharmacogenechips Inc., Chuncheon 200-160, Südkorea.