Methoden zur Qualitätskontrolle von Cistanche deserticola

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Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei & et al.

Die Traditionelle Chinesische MedizinCistancheist der saftige Stamm derCistanche DeserticolaYC Ma oder Cisanche tubulosa (Schenk) Wight mit trockenen, schuppigen Blättern. Es hat die Funktion, das Nieren-Yang zu tonisieren, Essenzen und Blut zu nähren, den Darm zu befeuchten und Abführmittel usw. Es wird hauptsächlich bei Nieren-Yang-Mangel, Essenz- und Blutmangel, Impotenz und Unfruchtbarkeit, Schmerzen und Schwäche in Taille und Knien, Schwäche eingesetzt von Muskeln und Knochen, Darmtrockenheit und Verstopfung. Das zeigt die moderne pharmakologische ForschungCistanchehat viele Funktionen wie die Verbesserung der sexuellen Funktion, Widerstand gegen Alzheimer und Parkinson, Verbesserung der Lern- und Gedächtnisfähigkeit, Anti-Aging, Anti-Müdigkeit, Schutz der Leber und Abführmittel [4]. Eine Vielzahl von Studien hat bestätigt, dass die Phenylethanoidglykoside inCistanche Deserticolahaben offensichtliche Auswirkungen auf die Verbesserung der Lern- und Gedächtnisfähigkeit, die Widerstandsfähigkeit gegen die Alzheimer-Krankheit und die Parkinson-Krankheit (4, Oligosaccharide und Polyole haben die Wirkung von Abführmitteln und Abführmitteln 64 ). Das "Pharmacopoeia of the People's Republic of China" misst nur den Gehalt an Phenylethanoidglykosiden Echinacosid und VerbascosidCistancheDeserticola, misst jedoch nicht die aktiven Komponenten seiner abführenden Wirkung, so dass es schwierig ist, eine umfassende Analyse der medizinischen Materialien von zu erreichenCistancheDeserticola. Qualitätskontrolle. Um diese Einschränkung zu überwinden und ein Multi-Index-Qualitätsbewertungssystem einzurichten, das sich auf die Hauptfunktionen und Indikationen von beziehtCistancheDeserticola, verwendete diese Studie HPLCELSDP4, um eine quantitative Analysemethode für Betain, Mannit, Fructose, Glucose und Saccharose in den medizinischen Materialien von zu etablierenCistancheDeserticola. Darüber hinaus 58 Chargen vonCistancheDeserticolaArzneistoffe unterschiedlicher Herkunft und 10 Chargen Arzneistoffe vonCistancheim Hotan-Gebiet von Xinjiang getestet, was eine Referenz für die umfassende Qualitätskontrolle und Bewertung von medizinischen Materialien liefern kannCistancheDeserticolain der Zukunft.

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1 Gerät und Reagenzien

1.1 Instrumente

Elektronische Waage Sartorius BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 Hochleistungsflüssigkeitschromatographie; ALLTECH 2000ES Verdunstungslichtstreudetektor (EISD); Ultraschallreiniger KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 Reagenzien

Kontrollsubstanz: Betain (Charge: {{0}}, Reinheit: 99,2 Prozent), Mannit (Charge: 10053-201304, Reinheit: 99,0 Prozent), D-Fructose (Charge: 111504-201703 , Reinheit: 99,8 Prozent ), D – Wasserfreie Glukose (Chargennummer: 110833-201506, Reinheit: 99,9 Prozent ), Saccharose (Chargennummer: 111507-201303, Reinheit: 99,8 Prozent ), alle vom China National Institute bezogen für die Lebensmittel- und Arzneimittelkontrolle.

Die medizinischen Materialien vonCistancheDeserticolawurden in der Inneren Mongolei, Xinjiang, Gansu und anderen Orten mit insgesamt 58 Chargen gesammelt. Sie wurden von Professor Tu Pengfei von der Peking University School of Pharmacy als getrocknete fleischige Stängel identifiziertCistancheDeserticolaYCMa der Lidangaceae-Pflanze, wie in Tabelle 3 gezeigt.

Die medizinischen Materialien vonCistancheDeserticolawurden in der Gegend von Hotan, Xinjiang, in insgesamt 10 Chargen gesammelt. Sie wurden von Professor Tu Pengfei von der Fakultät für Pharmazie der Peking-Universität als getrocknete, fleischige Stängel mit schuppigen Blättern von Cistanche tubulosa (Schenk) Wight der Liedangaceae-Pflanze identifiziert, wie in Tabelle 4 gezeigt.

1.3 Reagenzien

Acetonitril ist chromatographisch rein (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), Methanol ist chromatographisch rein (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.) und Wasser ist ultrareines Wasser.

2 Methoden und Ergebnisse

2.1 Chromatographische Bedingungen

Die Chromatographiesäule war eine ShodexAshaipak NH2P-50 4E Polymergelsäule (250 mm × 4,6 mm, 5 μm); die mobile Phase war Acetonitril-Wasser (77∶23); die Flussrate betrug 0,7 ml·min-1; die Säulentemperatur betrug 25 Grad; Lichtstreuungsdetektor (ELSD): Die Temperatur der Driftröhre betrug 100 Grad, und die Trägergasströmungsgeschwindigkeit betrug 3 l·min-1.

2.2 Herstellung der Referenzlösung

Nehmen Sie eine geeignete Menge Betain, Mannit, Fructose, Glucose und Saccharose-Referenzsubstanz, wiegen Sie sie genau ab, fügen Sie Wasser hinzu, um eine gemischte Lösung herzustellen, die 0,25 mg Betain, Mannit, Fructose, Glucose und Saccharose pro enthält 1 ml, gut schütteln und erhalten.

2.3 Herstellung der Testlösung

Nehmen Sie etwa 1,0 g davonCistanchemedizinisches Pulver (durch ein Sieb Nr. 4 passieren), genau wiegen, in einen braunen 1{12}}-ml-Messkolben geben, genau 50 ml 50-prozentiges Methanol hinzufügen, fest verschließen, schütteln, wiegen 30 min einweichen und dann 40 min mit Ultraschall (Leistung 250 W, Frequenz 35 kHz) herausnehmen, abkühlen lassen, erneut wiegen, 50 Prozent Methanol zur Massereduzierung zugeben, gut schütteln und stehen lassen es steht. 5 ml Überstand genau absaugen, in einen 25-ml-Messkolben geben, mit 50 Prozent Methanol bis zur Marke verdünnen, gut schütteln und durch eine mikroporöse 0,2-μm-Membran filtrieren.

2.4 Bestimmungsverfahren

5 und 10 μL der Referenzlösung bzw. 5 μL der Testlösung genau entnehmen, in den Flüssigkeitschromatographen injizieren, die Peakfläche aufzeichnen und gemäß der logarithmischen Gleichung der Zweipunktmethode des externen Standards berechnen.

2.5 Systemeignungstest

Ziehen Sie gemäß den chromatographischen Bedingungen unter Punkt 2.1 genau 5 μ der Referenzlösung bzw. der Testlösung und injizieren Sie sie in die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie, messen und zeichnen Sie das Chromatogramm auf, wie in Abbildung 1 gezeigt. Die chromatographischen Peaks der Testprobe zeigte die gleiche Retentionszeit wie die chromatographischen Peaks der Referenzsubstanz, die Auflösung war gut und die chromatographischen Bedingungen waren machbar.

Hinweis: A. Kontrollsubstanz; B.CistancheProbe Nr. 49; 1. betaime ; 2. fnuckese ; 3. Mannibol; 4. Glukose; 5. überleben

Abb. 1 HPLC-Profile der Referenzsubstanz und der Probe von Cistanche Nr. 49

2.6 Untersuchung linearer Zusammenhänge

Nehmen Sie geeignete Mengen von Betain, Mannitol, Fruktose, Glukose und Saccharose als Referenzsubstanzen, wiegen Sie sie genau ab und fügen Sie Wasser hinzu, um jeweils 1 ml herzustellen, das Betain enthält 0.496 0 mg, Mannitol {{3} }.994 0 mg, Frucht 1.0126 mg, Glukose 1.0882 mg und Saccharose 0.9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0,9920, 1,9840, 2,9760 μ, Mannit 0,1988, 0,4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 μ, Fruktose 0,5063, 1,012 6. 2.025 2. 4.050 4. 5.063 0. Chromatographische Bedingungen wurden injiziert und detektiert, und die Peakfläche wurde aufgezeichnet; dann wurde der logarithmische Wert X (ug) jeder Injektionsmenge der Referenzsubstanz als Abszisse verwendet, und der logarithmische Wert Y der Peakfläche war die Ordinate, und die Standardkurve wurde gezeichnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 gezeigt.

Tabelle 1 Die Ergebnisse der Untersuchung der linearen Beziehung

2.7 Präzisionstest

Ziehe genau die Testlösung (Probe Nr. 49) unter den obigen chromatographischen Bedingungen, injiziere kontinuierlich 6 Mal, messe die Peakfläche jedes chromatographischen Peaks und berechne seinen RSD-Wert. Ergebnisse Die RSDs der Peakbereiche von Betain, Mannit, Fructose, Glucose und Saccharose waren 0,84 Prozent, 2,56 Prozent, 1,27 Prozent, 2,62 Prozent bzw. 1,52 Prozent, was darauf hinweist, dass die Präzision des verwendeten Instruments in Diese Studie war gut. 2.8 Wiederholbarkeitstest

Nehmen Sie 6 Proben vonCistancheDeserticola(Probe Nr. 49), bereiten Sie die Testlösung gemäß dem Verfahren unter Punkt 2.3 vor, messen Sie die Peakfläche jedes chromatographischen Peaks und berechnen Sie den entsprechenden Gehalt. Ergebnisse Die durchschnittlichen Gehalte an Betain, Mannit, Fructose, Glucose und Saccharose (n=6) betrugen 7,93 Prozent, 7,27 Prozent, 8,74 Prozent, 2,75 Prozent und 4,81 Prozent, und die RSDs betrugen 2,83 Prozent, 1,94 Prozent, {{ 18}},97 Prozent bzw. 2,60. Prozent, 1,40 Prozent, was darauf hinweist, dass die Methode eine gute Wiederholbarkeit hat. 2.9 Stabilitätstest

Nehmen Sie die Testlösung (Probe Nr. 49), injizieren Sie sie bei 0, 4, 8, 12, 16 und 24 h nach der Vorbereitung für die Messung und berechnen Sie den RSD-Wert jedes chromatographischen Peaks. Ergebnisse Die RSDs von Betain, Mannitol, Fructose, Glucose und Saccharose waren 0,61 Prozent, 1,92 Prozent, 1,34 Prozent, 2,83 Prozent bzw. 0,69 Prozent, was anzeigt, dass die Testlösung gut war Stabilität innerhalb von 24 Stunden. 2.10 Erholungstest

Nehmen Sie 6 Proben vonCistancheDeserticolamit bekanntem Gehalt (Probe Nr. 49), genau 0,25 g wiegen, in einen 50-ml-Messkolben geben und genau 25 ml der gemischten Referenzlösung bei einer Konzentration von 1 entnehmen: 1 (enthält {{10}},7900 mg Betain). ml-, Fructose 0,7236 mg"mL-1, Mannit 0,8812 mg·mL-1, Glucose 0,2708 mg·mL-1, Saccharose 0,4883 mg'mL-') wurden der Probe zugesetzt, und die Testlösung wurde gemäß dem Verfahren unter 2.3 hergestellt, gemäß den oben erwähnten chromatographischen Bedingungen nachgewiesen, ihre Wiederfindung berechnet, die Ergebnisse sind in Tabelle 2 gezeigt, was zeigt, dass das Verfahren eine gute Genauigkeit aufweist.

Tabelle 2: Messergebnisse der Probenwiederfindungsrate von 5 zu testenden Komponenten (n=6)

3 Diskussion

3.1 Auswahl der Indexkomponenten

Die gesamten Oligosaccharide vonCistanchesind die wirksamen Teile vonCistanchefür Abführmittel. Der Autor analysierte die chemische Zusammensetzung dieses Teils mittels LC-MS und der Referenzsubstanz und stellte fest, dass dieser Teil hauptsächlich aus Betain, Mannit, Fructose, Glucose und Saccharose besteht. Daher wurden diese 5 Komponenten als Indexkomponenten von ausgewähltCistancheDeserticola, und das Inhaltsbestimmungsverfahren wurde etabliert.

3.2 Auswahl von Chromatographiesäulen

Die fünf zu testenden Komponenten Betain, Mannit, Fructose, Glucose und Saccharose sind relativ polar und können nicht in der Umkehrphasen-Cn-Säule zurückgehalten werden. Im Allgemeinen treten Peaks innerhalb von 1-2 Minuten auf und die Komponenten können nicht getrennt werden. Aminosäulen Waters Bonoapar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 μm) und Phenomenex Bondclone 10 NH, (300 mm × 3,9 mm, 10 μm) für die Zucker- und Polyoltrennung sowie polymerbasierte Aminosäulen Prevail Carbohydrate ES (250 mm ×4,6 mm, 5 μm), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm × 4,6 mm, 5 μm). Die Ergebnisse zeigen, dass die Polymermatrix-Aminosäule diese fünf Komponenten effektiv trennen kann.

3.3 Detektorauswahl

Die fünf zu testenden Komponenten haben keine offensichtliche UV-Absorption, und der Inhalt des UV-Detektors kann nicht direkt bestimmt werden. Daher hat diese Arbeit ein quantitatives Analyseverfahren für die Zuckeralkoholkomponenten etabliertCistancheDeserticolaunter Verwendung von HPLC-EISD. Die Ergebnisse zeigen, dass das Verfahren eine hohe Empfindlichkeit, gute Wiederholbarkeit und hohe Genauigkeit aufweist und zur Qualitätskontrolle eingesetzt werden kannCistancheDeserticolaund andere medizinische Materialien, die Betain und Zuckeralkohole enthalten.

3.4 Untersuchung der Herstellungsmethode der Testlösung

Verschiedene Extraktionslösungsmittel einschließlich Wasser, 30 % Methanol, 50 % Methanol, 70 % Methanol, Methanol usw. wurden jeweils verglichen. Die Ergebnisse zeigten, dass es außer der etwas geringeren Extraktionsrate von 70 Prozent Methanol und Methanollösungsmittel keinen signifikanten Unterschied zu anderen Lösungsmitteln gab, sodass die direkte Auswahl getroffen wurde. Als Lösungsmittel wurde unter dem Punkt "Gehaltsbestimmung" 50-prozentiges Methanol verwendetCistancheim Arzneibuch der Volksrepublik China, und es wurde gemäß dem Herstellungsverfahren der relevanten Testlösung hergestellt und dann fünffach verdünnt, um die Zuckeralkoholkomponenten zu bestimmen.

3.5 Nachweis und Analyse von Proben mit unterschiedlichen Basen

In dieser Studie wurden die Inhalte von 5 Komponenten in 58 Chargen vonCistancheDeserticolaund 10 Chargen vonCistancheDeserticolaArzneistoffe bestimmt. Die Massenanteile von Betain, Mannitol, Fructose, Glucose und Saccharose in 58 Chargen vonCistancheDeserticolaProben waren 2,73 Prozent -17,65 Prozent , 2,46 Prozent -16,34 Prozent , 2,52 Prozent {{10}},74 Prozent , 0,97 Prozent -14,06 Prozent , 3,15 Prozent -27,16 Prozent ; Mannitol, Fructose und Glucose waren 1,00 Prozent -13,04 Prozent, 2,98 Prozent -8,85 Prozent, 1,09 Prozent -5,33 Prozent in den 10 Chargen vonCistancheProben, und Betain und Saccharose wurden nicht nachgewiesen. Die Inhaltsstoffe medizinischer Materialien unterscheiden sich stark zwischen den Chargen, und es gibt keine zu befolgende Regel, was auf die Notwendigkeit hindeutet, einen Standard zur Bestimmung des Inhalts festzulegen, um die Qualität medizinischer Materialien zu kontrollieren. Außerdem kann dieses Verfahren zwei Arten effektiv unterscheidenCistancheGrundpflanzen, nämlichCistancheenthält kein Betain und Saccharose, während der Gehalt dieser beiden Komponenten höher istCistanche Deserticola. Dies bietet auch eine Grundlage für die Analyse der Unterschiede in Textur und Lebensraum der beiden ArzneistoffeCistanche Deserticola. Verglichen mit dem medizinischen Material vonCistanche Deserticola, die Textur ist weicher und wird lokal als "Soft Dayun" bezeichnet, währendCistanchewird "Chai Dayun" genannt, weil es Saccharose enthält (3,15 Prozent ~27,16 Prozent). ).Cistanche Deserticolawird hauptsächlich in Alxa in der Inneren Mongolei vertrieben, währendCistancheist hauptsächlich im Hotan-Gebiet von Xinjiang verbreitet, wo die Temperatur höher ist als im Alxa-Gebiet, und in der Umgebung wird häufig Tropfbewässerung verwendet, aber sobald die Temperatur sinkt,Cistanchewird schweren Schaden erleiden. Gefrierschäden stehen einerseits in einem gewissen Zusammenhang mit seinem hohen Wassergehalt, andererseits hat es etwas mit den darin enthaltenen Inhaltsstoffen zu tun. Betain 243 ist eine wichtige osmotische Anpassungssubstanz, die eine wichtige Rolle bei der Verbesserung der Stressresistenz von Pflanzen spielt, wie z. B. Resistenz gegen Salzgehalt, Trockenheit, niedrige Temperaturen und starkes Licht. Das liegt gerade an dem hohen Anteil an Betain, der darin enthalten istCistanche Deserticoladass es eine bessere Beständigkeit gegen Salzlauge, Trockenheit und Frostschäden hat alsCistanche, und hat eine relativ weite Verbreitung.

3.6 Analyse vonCistancheDeserticolaProben unterschiedlicher Herkunft

Unter den 58 Partien WüsteZistanchemedizinische Materialproben, 45 Chargen wurden von Alxa League, Innere Mongolei, hergestellt, 3 Chargen stammten von Wangyedi (Dengkou County), Innere Mongolei, und 1 Charge war unbekannt. Alle 49 Arzneistoffchargen hatten unterschiedliche Gehalte von 5 Komponenten. Es gibt jedoch keinen signifikanten Unterschied. Der Grund für die Analyse kann sein, dass die medizinischen Materialien alle im selben Wüstengebiet hergestellt werden, die Ökologie und geografische Umgebung ähnlich sind und die Produktqualität relativ einheitlich und stabil ist. Es werden 3 Chargen im Landkreis Minqin, Gansu, und 6 Chargen aus Xinjiang hergestellt. Gemäß der Analyse in Abbildung 2 spiegelt sich der Hauptunterschied im Vergleich zu den in der Inneren Mongolei hergestellten medizinischen Materialien im Gehalt an Fructose und Saccharose wider. Der Saccharosegehalt der Arzneistoffe war relativ hoch, aber angesichts der geringen Probenmenge aus den beiden Herkünften muss diese Schlussfolgerung durch das Sammeln weiterer Proben verifiziert werden. 3.7 Zusammenfassung

In dieser Studie wurde HPLC Wang ISD für die gleichzeitige Bestimmung von 5 aktiven Bestandteilen von Abführmitteln etabliert, was eine bequemere, effizientere und genauere Methode für die Qualitätskontrolle darstelltCistanche Deserticola, und lieferte eine Grundlage für die Verbesserung des Qualitätsstandards und die Weiterentwicklung vonCistancheDeserticola. aussagekräftiger Hinweis.

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