Unterschiede in der Zusammensetzung und medizinischen Wirksamkeit von Rohprodukten und dampfbehandelten Weinprodukten von Cistanches Herba

Abstrakt:

ObjektivVergleich der Veränderungen der chemischen Zusammensetzung und der medizinischen Wirksamkeit von Roucongrong (Cistanches Herba) vor und nach der Verarbeitung, um das Prinzip des Schmorens mit Wein zu klären.

Methoden: LC-MS wurde angewendet, um die Arten der chemischen Zusammensetzung vor und nach der Zubereitung von Cistanches Herba zu identifizieren, kombiniert mit einer multivariaten statistischen Analyse, um die Ungleichheit der Komponenten vor und nach dem Schmoren mit Wein zu ermitteln. Der Wirksamkeitsunterschied wurde durch das Rattenmodell des hydrierten Cortison-Nieren-Yang-Mangels nachgewiesen.

ErgebnisseInsgesamt wurden 45 chemische Komponenten identifiziertCistanches Herba-Proben; Die Verbindungen trugen zu den Unterschieden zwischen beiCistanches Herba und in Wein gedünstete Cistanches HerbaSindEchinacosid, Verbascosid, Isoacteosid und Tubulosid B; Der Gesamtextrakt aus Phenylethanoidglykosiden aus Cistanches Herba hat eine bessere Wirkung auf die Verbesserung des Rattenmodells mit Nieren-Yang-Mangel als mit Wein gedünstetes Cistanches Herba. Schlussfolgerung: Die Zusammensetzung von Cistanche verändert sich, nachdem es mit Wein gedünstet wurde, und die Wirkung bei Nieren-Yang-Mangel wurde verstärkt. Die Inhaltsstoffe der Transformation von Cistanches Herbato, mit Wein gedünstetes Cistanches Herba, können Wirkstoffe sein, die die Niere stärken und Yang unterstützen.

Schlüsselwörter: Cistanches Herba; Weingedünstete Cistanches Herba;Nieren-Yang-Mangel;Echinacosid;Verbascosid; Isoacteosid;Tubulosid B

HOCHWERTIGE CISTANCHE-KRÄUTER ZU VERKAUFEN

Unterstützender Service von Wecistanche

E-Mail:wallence.suen@wecistanche.com

WhatsApp/Tel:+86 15292862950

Es ist als „Ginseng“ bekannt und wird hauptsächlich in der Inneren Mongolei, Ningxia (Azuqi), Gansu (Changma), Xinjiang und anderen Regionen verbreitet [1]. Cistanche hat einen warmen Charakter, einen süßen und salzigen Geschmack und gelangt in die Nieren- und Dickdarmmeridiane. Es nährt die Leber und die Nieren, fördert die Essenz und das Blut, befeuchtet den Darm und lindert Verstopfung. Es kann bei Nieren-Yang-Mangel, Impotenz und Unfruchtbarkeit, Schmerzen in der Taille und in den Knien, Muskel- und Knochenschwäche, trockenem Darm und Verstopfung eingesetzt werden [2]. Moderne Forschungen zeigen, dass die fleischigen Stängel mit Schuppenblättern von Cistanche hauptsächlich eine Vielzahl chemischer Komponenten wie Phenylethanolglycoside, Cyclopentanetherterpene und deren Glykoside, Lignane, Zucker usw. enthalten [3] und vielfältige pharmakologische Wirkungen haben, wie zAnti-Aging,Antioxidans,Anti-Demenz,Anti-Müdigkeit, Befeuchtung des Darms und Linderung von Verstopfung [4].

Nach dem Schmoren mit Wein verstärkt sich die nierenstärkende und Yang-verstärkende Wirkung von Cistanche. Das Verarbeitungsprinzip ist nicht eindeutig erklärt. Fan Yanan et al. [5-7] untersuchte die Auswirkungen von Cistanche auf den Stuhlgang von Ratten, die Immunfunktion, enterische Neurotransmitter und verwandte Genexpressionen vor und nach der Verarbeitung. Da et al. nutzte den Einfluss von Phenylethanolglycosiden vor und nach der Verarbeitung, um das Verarbeitungsprinzip zu erklären; Zhang Chao et al. [8] nutzten die Veränderungen im Gehalt an Phenylethanolglykosiden vor und nach der Verarbeitung, um das Verarbeitungsprinzip zu erklären; Zhang Shuyun et al. [9] nutzten die Veränderungen im Betaingehalt vor und nach der Verarbeitung, um die Auswirkung der Verarbeitung auf Cistanche zu erklären. Die vorhandene Literatur zur Verarbeitung von Cistanche konzentriert sich hauptsächlich auf die Pharmakologie, und die Forschung zu Komponenten konzentriert sich auch auf die Veränderungen im Inhalt spezifischer Komponenten, ohne dass eine systematische Untersuchung der Komponentenunterschiede erfolgt. Bei diesem Experiment wurde die Technologie der Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) in Kombination mit einer multivariaten statistischen Analyse verwendet, um die chemischen Komponenten in Cistanche zu identifizieren, die Unterschiede zwischen rohem Cistanche und in Wein gedünsteten Produkten zu finden und den Unterschied in der Wirksamkeit zu untersuchen rohe Cistanche- und in Wein gedünstete Produkte anhand eines Rattenmodells eines durch Hydrocortison induzierten Nieren-Yang-Mangels, um die materielle Grundlage zu erklärenCistanche stärkt die Nieren und fördert Yangund das Verarbeitungsprinzip der in Wein gedünsteten Cistanche.

HOCHWERTIGE CISTANCHE-KRÄUTER ZU VERKAUFEN

1 Materialien

1.1 Instrumente

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL elektrostatisches Feld-Tandem-Ionenfallen-Massenspektrometer mit hoher Auflösung (Thermo Fisher Scientific, USA), Theraio Xcaliber-Workstation; Elektronische Waage BT125D 1/100000 (Sartorius Instrument System, Deutschland); KQ500DE CNC-Ultraschallreiniger (Kunshan Ultraschallinstrument Co., Ltd.); XHF-D-Hochgeschwindigkeitsdispergierer (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Multiskan FC Mikroplatten-Reader (Thermo Scientific); HC-3518-Hochgeschwindigkeitszentrifuge (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B multifunktionaler freiwilliger Aktivitätsrekorder von Ratten (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Drogen

Methanol in Massenspektrometriequalität (Fisher); Ameisensäure in Massenspektrometriequalität (Massenanteil 99 %, Sigma Aldrich); Wasser (Watsons destilliertes Wasser); Jinkui Shenqi Pills (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd. Pharmaceutical Factory, Chargennummer 1701653); Hydrocortisonsuccinat-Natriumsalz (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Chargennummer 011705067); Superoxiddismutase (SOD)-Kit (Chargennummer 20170115) und Malondialdehyd (MDA)-Kit (Chargennummer 20170117) wurden von Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd. gekauft; Testosteron (T) und Östradiol (E2) wurden im Qingdao Kechuang Quality Inspection Center bestimmt, und Kreatinin (CREA) und Blut-Harnstoff-Stickstoff (BUN) wurden im Analyse- und Testzentrum der Medizinischen Universität der Inneren Mongolei bestimmt.

1.3 Tiere

100 männliche SD-Ratten mit einem Gewicht von 180-200 g wurden von der Xinglong Experimental Animal Farm im Bezirk Haidian, Peking, Lizenznummer: SCXK (Peking) 2016-0003 gekauft. Dieser Tierversuch wurde von der Ethikkommission der Universität für Chinesische Medizin Peking, Ethiknummer: BUCM-4-2022091301-3095, genehmigt.

1.4 Beispiele

Sechs Chargen Cistanche deserticola wurden von Professor Li Xiangri von der School of Chinese Medicine der Beijing University of Chinese Medicine als authentisch identifiziert und aus den getrockneten fleischigen Stängeln mit Schuppenblättern von Cistanche deserticola YC Ma, einer Pflanze aus der Familie der Orobanchaceae, gewonnen. Detaillierte Informationen zu den Proben sind in Tabelle 1 aufgeführt.

Tabelle 1 Informationsblatt der Cistanches Herba-Proben

2 Methoden

2.1 Probenvorbereitung

2.1.1 Zubereitung von Rohprodukten Nehmen Sie saubere Cistanche deserticola, machen Sie sie weich, schneiden Sie sie in dicke Scheiben und trocknen Sie sie.

2.1.2 Zubereitung von mit Wein gedünsteten Produkten

Nehmen Sie 100 g Cistanche-Deserticola-Scheiben, fügen Sie 30 ml Reiswein hinzu, mischen Sie alles gut und schmoren Sie, bis der Wein absorbiert ist. 12 Stunden in Wasser schmoren, herausnehmen, etwas abkühlen lassen und trocknen. Siehe Abbildung 1 für rohe Cistanche-Deserticola-Proben und mit Wein gedünstete Cistanche-Deserticola-Proben.

2.2 Studie zum Unterschied der Bestandteile von Cistanche deserticola vor und nach dem Dünsten in Wein

2.2.1 Vorbereitung der Lösung

Nehmen Sie etwa {{0}},2 g trockenes Probenpulver (durch ein 65--Maschensieb gegeben), wiegen Sie es genau ab, geben Sie es in einen braunen 50-ml-Messkolben und geben Sie 25 ml 50 %iges Methanol hinzu wässrige Lösung, dicht verschließen, Masse abwiegen, 30 Minuten einweichen, 40 Minuten mit Ultraschall behandeln (Leistung 250 W, Frequenz 35 kHz), abkühlen, erneut wiegen, 50 %ige wässrige Methanollösung hinzufügen, um die verlorene Masse auszugleichen, schütteln Nun lassen Sie es stehen, filtrieren Sie den Überstand durch eine 0,22 μm mikroporöse Filtermembran und geben Sie das Filtrat in eine braune Flüssigphasenflasche, um die Lösung zu erhalten.

HOCHWERTIGE CISTANCHE-KRÄUTER ZU VERKAUFEN

2.2.2 Chromatographische Bedingungen

Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 Chromatographiesäule (100 mm×2,1 mm, 1,7 μm), Säulentemperatur 35 Grad; Probenkammertemperatur von 10 Grad, Probeninjektionsvolumen von 3 μl, Methanol (A)-0,1 % wässrige Ameisensäurelösung (B) als mobile Phase, Gradientenelution: 0-4 min, 10 %{ {13}}% Methanol; 4-18 min, 26 %-40 % Methanol; 18-24 min, 40 %-100 % Methanol; 24-28 Min., 100 % Methanol. Die Volumenflussrate betrug 0,3 ml/min und die Detektionswellenlänge betrug 330 nm.

2.2.3 Bedingungen der Massenspektrometrie

Es wurde eine Elektrospray-Ionisationsquelle (ESI) verwendet, negatives Ionenmodus-Scannen, die Kapillartemperatur betrug 350 Grad, die Volumenströmungsrate des Hüllgases betrug 30 Arb, die Volumenströmungsrate des Hilfsgases betrug 10 Arb, die Sprühspannung betrug 3

KV, Kapillarspannung war –35 V, Röhrenlinsenspannung war –110 V, Scanbereich war m/z 100-1 000, Datenerfassungssystem war Xcalibur 2.1.

2.2.4 Hauptkomponentenanalyse (PCA)

Nach Erhalt der zweidimensionalen Matrix genauer Massen-Retentionszeit-Datenpaare zeigt die Instrumententafel alle automatisch importierten genauen Retentionszeit-Informationen an und die PCA-Methode des erweiterten Statistikmoduls wird zur Analyse verwendet.

2.2.5 Orthogonale partielle Diskriminanzanalyse der kleinsten Quadrate (OPLS-DA) LCMS kombiniert die hohe Trennung der Flüssigkeitschromatographie mit der hohen Empfindlichkeit der Massenspektrometrie. Die gesammelten Daten sind recht umfangreich und zur Verarbeitung der Daten ist eine multivariate statistische Analyse erforderlich. OPLS-DA unterteilt die Daten in zwei Gruppen und verwendet ein überwachtes statistisches Modell, um eine große Anzahl orthogonalisierter Spektren zu erhalten, die die Unterschiede zwischen den beiden Probengruppen deutlich zeigen. Im S-Plot-Format der zusätzlichen Abbildung stellt jeder Punkt ein genaues Datenpaar zur Massenretentionszeit dar, die X-Achse stellt die Variable dar. Je weiter der Datenpunkt vom Nullpunkt entfernt ist, desto größer ist der Beitrag des Punktes zur Probendifferenz ; Die Y-Achse stellt die Korrelation zwischen Proben derselben Probengruppe dar. Je weiter das genaue Datenpaar aus Masse und Retentionszeit vom Nullpunkt entfernt ist, desto stärker ist die Korrelation. Daher stellen die massengenauen Retentionszeit-Datenpaare an beiden Enden der S-förmigen Kurve die zuverlässigsten charakteristischen Ionen jeder Probengruppe dar.

HOCHWERTIGE CISTANCHE-KRÄUTER ZU VERKAUFEN

2.2.6 Massenspektrometrische Strukturanalyse

Nach Erhalt der charakteristischen Ionen wurden die Elementzusammensetzung und die Verbindungszuordnung durchgeführt, indem die genaue relative Molekularmasse berechnet und die vorhandene Datenbank und relevante Literatur kombiniert wurden, um die unterschiedlichen Komponenten zu identifizieren.

2.3 Studie zum Wirksamkeitsunterschied vor und nach dem Schmoren mit Wein

2.3.1 Herstellung von Cistanche deserticola-Extrakt

Cistanche deserticola (Chargennummer 160901) und das entsprechende in Wein gedünstete Cistanche deserticola-Pulver wurden gemäß den Bedingungen unter „2.2.1“ extrahiert, nach Ultraschallbehandlung filtriert, zweimal wiederholt, das Filtrat vereinigt, durch Vakuumdestillation konzentriert und eingefroren. getrocknet.

2.3.2 Tierversuchsgruppierung und Arzneimittelverabreichung

Abb. 1 Cistanches Herba A und in Wein gedünstete Cistanches Herba B

(1) Gruppierung: Ratten erhielten freien Zugang zu Wasser und Nahrung. Nach einer Woche adaptiver Fütterung wurden sie zufällig in 5 Gruppen (Tabelle 2) mit 10 Ratten in jeder Gruppe eingeteilt, nämlich normale Gruppe, Modellgruppe, rohe Cistanche-Deserticola-Gruppe (PR), mit Wein gedünstete Cistanche-Deserticola-Gruppe (PW). und Positivkontrolle der Jinkui Shenqi Pill-Gruppe (JK). (2) Modellierung: Mit Ausnahme der normalen Gruppe erhielten alle anderen vier Gruppen an 14 aufeinanderfolgenden Tagen eine intramuskuläre Injektion von Hydrocortison-Natriumsuccinat mit einer Dosis von 20 mg/kg. Der normalen Gruppe wurde die gleiche Dosis normaler Kochsalzlösung injiziert. Der Allgemeinzustand der Ratten in jeder Gruppe wurde beobachtet, um festzustellen, ob sie Symptome wie Angst vor Kälte, Vorliebe für Wärme, kalte Gliedmaßen, klarer und langer Urin, zusammengerollter und gebogener Rücken, stumpfes und unordentliches Haar und psychische Depression zeigten. Gleichzeitig wurden das Körpergewicht, die Anzahl spontaner Aktivitäten, die Nahrungsaufnahme, die Wasseraufnahme, die Urinausscheidung und andere Indikatoren der Ratten in jeder Gruppe gemessen.

(3) Verabreichung: Die Dosierung an Ratten wurde auf der Grundlage der klinischen Dosierung von Jinkui Shenqi Pills und Cistanche deserticola berechnet. Die Dosierung jeder Cistanche deserticola-Gruppe betrug 1,80 g/kg, ausgedrückt als Rohdrogenmenge. Die spezifische Dosierung ist in Tabelle 2 aufgeführt. Jeder Extrakt aus Cistanche deserticola und Jinkui Shenqi Pills wurde mit entionisiertem Wasser zu Lösungen einer bestimmten Konzentration verarbeitet. Die Lösung wurde 30 aufeinanderfolgende Tage lang jeden Tag intragastrisch mit einem intragastrischen Volumen von 10 ml/kg verabreicht. Der Normalgruppe und der Modellgruppe wurde täglich eine gleiche Menge entionisiertes Wasser intragastrisch verabreicht. Das Körpergewicht wurde wöchentlich gemessen und das intragastrische Volumen entsprechend dem Körpergewicht der Ratten angepasst. Nach der Verabreichung ließ man die Ratten 12 Stunden lang fasten. Nach der Pentobarbitalanästhesie wurde zur Bestimmung des Serumindex Blut aus der Bauchschlagader entnommen. Zur relevanten Indexerkennung wurden Nieren, Hoden, Nebenhoden, Samenbläschen und Prostata entnommen.