Wie reduziert Cistanche-Extrakt entzündliche Hyperplasie?

Kontakt: Audrey Hu WhatsApp/hp: 0086 13880143964 E-Mail:audrey.hu@wecistanche.com

Reduktion der entzündlichen Hyperplasie im Darm bei Mäusen, die zu Dickdarmkrebs neigen, durch Wasserextrakt aus Cistanche deserticola

Yamin Jia,1,2 et al

CistancheDeserticola wird häufig in der traditionellen chinesischen Medizin verwendet, um viele Gesundheitsprobleme zu behandeln, darunter das Reizdarmsyndrom oder Verstopfung. Diese Studie wurde entwickelt, um die Wirksamkeit eines Wasserextrakts von C. deserticola bei der Prävention von Darmkrebs in einem Mausmodell zu testen. Polysaccharid-reicher Wasserextrakt von C. deserticola wurde durch Kochen seines Stammpulvers in destilliertem Wasser hergestellt. Als experimentelles Modell wurden Tgfb1Rag2-Nullmäuse verwendet. Hier zeigten wir, dass die Fütterung von Wasserextrakt von C. deserticola die Anzahl der Schleimhäute signifikant reduzierteHyperplasieund intestinale Helicobacter-Infektion bei Mäusen. Diese vorteilhafte Wirkung korrelierte mit einer signifikanten Stimulierung des Immunsystems, was durch die Vergrößerung der Milz mit einer erhöhten Anzahl von Milz-Makrophagen und natürlichen Killerzellen und mit einer stärkeren Zytotoxizität von Splenozyten belegt wird. In-vitro-Wasserextrakt von C. deserticola verstärkte die Zytotoxizität naiver Milzzellen gegen eine menschliche Dickdarmkrebs-Zelllinie, und in Makrophagenkulturen wurde die Stickoxid-Synthase II-Expression hochreguliert und die Phagozytose stimuliert. Zusammenfassend zeigen unsere Daten, dass die orale Verabreichung von C. deserticola-Extrakt abnimmtentzündlichhyperplastischPolypen- und Helicobacter-Infektion bei Mäusen aufgrund seiner immunstimulierenden Aktivität, was darauf hindeutet, dass C.-Deserticola-Extrakt das Potenzial haben könnte, Darmentzündungen einschließlich Darmkrebs zu verhindern. Copyright © 2011 John Wiley & Söhne, Ltd.

Schlüsselwörter: pflanzliche Immunmodulation;CistancheExtrakt; Polysaccharide; Helicobacter;entzündlichHyperplasie; Darmkrebs.

CistancheExtraktKann reduzierenEntzündlichHyperplasie

EINLEITUNG

Darmkrebs ist weltweit die dritthäufigste Krebsart bei Männern und die zweithäufigste bei Frauen und die vierthäufigste Krebstodesursache (8 Prozent aller Krebstodesfälle; Ferlay et al., 2010). Epidemiologische Studien deuten darauf hin, dass viele Risikofaktoren im Zusammenhang mit dieser Krankheit, einschließlich genetischer (z. B. Darmkrebs in der Familie) (Strate und Syngal, 2005) und Ernährungsfaktoren (z. B. rotes Fleisch und wenig Ballaststoffe; Chao et al., 2005; Park et al., 2005) undentzündlichDarmerkrankungen (IBD; Eaden et al., 2001; von Roon et al., 2007; Lukas, 2010). Trotz der vielen neuen zytotoxischen Medikamente und verbesserten chirurgischen und strahlentherapeutischen Techniken, die zur Behandlung dieser Krankheit eingesetzt werden (Cunningham et al., 2010), ist ein großer Teil der Patienten mit Darmkrebs noch immer unheilbar; für 2008 werden weltweit etwa 608000 Todesfälle durch diese Krankheit geschätzt (Ferlay et al., 2010). Daher werden neuartige Therapien benötigt, und ein Kandidat ist die Immuntherapie. Verschiedene immuntherapeutische Ansätze wurden für die Behandlung von Darmkrebs evaluiert, und die bisherigen Ergebnisse sind ermutigend (Burgdorf et al., 2009). Es wurde gezeigt, dass pflanzliche Polysaccharide spezifische immunregulatorische Aktivitäten haben (Jiang et al., 2010), was darauf hindeutet, dass diese pflanzlichen Produkte als spezifisches immunstimulierendes Adjuvans gegen Darmkrebs verwendet werden könnten.

CistancheDeserticola Ma, bekannt als Rou Cong Rong in der chinesischen Kräutermedizin, wurde in Kräuterformeln für viele Gesundheitsprobleme, einschließlich Impotenz, krankhafte Leukorrhoe und Reizdarmsyndrom/Verstopfung, aufgenommen (Jiang und Tu, 2009). Experimentelle Studien haben unterschiedliche biologische Aktivitäten von verschiedenen Extrakten von C. deserticola gezeigt; Der Phenylethanoidglykoside-Extrakt dieses Krauts wirkt bei Mäusen ermüdungshemmend (Cai et al., 2010) und ist analgetisch und anti-entzündlichWirkungen bei Nagetieren (Lin et al., 2002), während seine Polysaccharide die Proliferation von T- und B-Lymphozyten in Lymphozytenkulturen stimulieren (Wu et al., 2005; Dong et al., 2007). Die Wirksamkeit des Polysaccharidextrakts von C. deserticola bei der Stimulierung der Immunantwort in vivo wurde jedoch noch nicht untersucht.

Rag2^-/-Mäusen fehlen reife T- und B-Lymphozyten, und auf dem gemischten Hintergrund (~97 Prozent 129 S6 und ~3 Prozent CF-1) entwickeln sie spontan entzündungsassoziierteHyperplasieim Darm (Engle et al., 1999). Die genetische Einführung des Tgfb1-Nullallels (Gen für den transformierenden Wachstumsfaktor b1 (TGF-b1)) in diesen Mäusestamm führt zu einer weiteren Progression vonHyperplasiezu Adenomen und Karzinomen (Engle et al., 2002), und die pathogene Mikroflora-abhängige Kolitis ist für die Entwicklung von Dickdarmkrebs erforderlich (Engle et al., 2002), was darauf hindeutet, dass dieser Mäusestamm ein ideales Modell dafür darstellt die Prüfung einer möglichen Therapie bei der Behandlung von entzündungs-/CED-induziertem Darmkrebs. In dieser Studie demonstrieren wir zum ersten Mal die Wirksamkeit von Polysaccharid-reichem Wasserextrakt von C. deserticola bei der Reduzierung vonentzündlichHyperplasiebei diesem Modell.

MATERIALEN UND METHODEN

Polysaccharidreiches Wasserextrakt aus C. deserticola-Zubereitung.

Herbal C. deserticola wurde von Dr. Y. Guo (China Agricultural University) in der autonomen Region Innere Mongolei, China, geerntet. Das Pulver der ganzen getrockneten Stiele (300 g) wurde zweimal in bidestilliertem Wasser gekocht: zuerst für 1 h in 500 ml Wasser, gefolgt von einer Sammlung des Überstands, dann für 45 min in 400 ml Wasser. Die Überstände wurden nach jedem Kochen durch ein Whatman-Filterpapier (mittelschnell) filtriert und vereinigt. Die Extraktlösung wurde durch Gefriertrocknung getrocknet und bei 80°C gehalten. Das Endprodukt betrug etwa 10 g (Ausbeute: ~3 Prozent).

Mäuse und Zellkulturen. TGF-b1-defiziente Mäuse (Tgfb1 plus /- Rag2^-/-) mit gemischtem Hintergrund (~97 Prozent 129 S6 und ~3 Prozent CF-1) wurden von einer Zuchtkolonie erhalten, die unter pathogenfreien Bedingungen in der Tieranlage des Jack Bell Research Center (Vancouver, BC) gehalten wurde. Diese Mäuse stammen aus dem Mouse Models of Human Cancers Consortium (MMHCC) Repository (National Cancer Institute at Frederick, MD, USA). C57BL/6 J (B6)-Mäuse (männlich, 8–10 Wochen alt) wurden vom Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA) gekauft. Alle Tiere für die Experimente wurden nach dem Absetzen im Alter von 4 Wochen unter herkömmlicher Haltung und Ernährung (5001 Rodent Diet, LabDiet) gehalten, und eine Kräuterbehandlung und Probenentnahme wurden gemäß den Richtlinien des Canadian Council on Animal Care unter durchgeführt
Protokolle, die vom Animal Use Subcommittee der University of British Columbia genehmigt wurden.

Sowohl die menschliche SW480-Kolon-Adenokarzinom-Zelllinie als auch die RAW 246.7-Maus-Leukämie-Makrophagen-Zelllinie wurden in Dulbecco's modifiziertem Eagle's Medium (DMEM, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) mit 10 Prozent fötalem Rind gezüchtet Serum (FBS) (komplettes DMEM-Medium) bei 37-C in einem befeuchteten Inkubator mit 5 % CO2/95 % Luft. Milzzellen wurden durch vorsichtiges Zerschlagen von Milzfragmenten in phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) isoliert, gefolgt von der Entfernung der Erythrozyten unter Verwendung von Lysepuffer (0,15 M NH4Cl, 1,0 mM KHCO3, 0,1 mM EDTA, pH 6,8). Nach erneutem Waschen mit PBS wurden Splenozyten in RPMI 1640-Medium, ergänzt mit 10 Prozent FBS (vollständiges RPMI-Medium), suspendiert.

CistancheExtraktKann reduzierenEntzündlichHyperplasie

Behandlung extrahieren.

Der Kräuterextrakt, genanntCistancheExtraktin dieser Studie wurde schließlich durch Rekonstitution von getrocknetem Pulver mit sterilisiertem doppelt destilliertem Wasser hergestellt und enthielt 2–3 Prozent (w/w) Phenylethanoide, 65–7 0 Prozent (w/w) Polysaccharide und 0,6–1 Prozent (w/w) Protein – basierend auf den folgenden Assays: Die Anzahl der Phenylethanoide wurde durch Extinktion bei 332 nm unter Verwendung einer zuvor beschriebenen Spektrophotometrie bestimmt (Ouyang et al., 2005); der Gehalt an Polysacchariden wurde unter Verwendung eines Standard-Phenol-Schwefelsäure-Verfahrens (Dubois et al., 1956) nach Ethanolfällung gemessen; und das Protein wurde durch einen Bio-Rad-Proteinassay gemäß dem Protokoll des Herstellers (Bio-Rad Lab, Hercules, CA, USA) bestimmt. Die Dosierung des Cistanche-Extrakts betrug 0,4 g/kg/Tag, basierend auf unserer Pilotstudie. Die durchschnittliche Wasseraufnahme pro erwachsener Maus pro Tag betrug ungefähr 4 ml, und wenn 1 ml Trinkwasser 3 mg enthieltCistancheExtrakterhielt jede Maus täglich 12 mg des Extrakts oral verabreicht. Basierend auf der Tatsache, dass das durchschnittliche Körpergewicht einer erwachsenen Maus 30 g betrug, enthielt das Trinkwasser 3 mg/mlCistancheExtraktverabreichte den Mäusen eine Dosis von 0,4 g/kg/Tag. Den Mäusen wurde Trinkwasser ad labium verabreicht, das 3 mg/ml enthieltCistancheExtraktdas mindestens alle zwei Tage nachgefüllt wurde, ab einem Alter von zwei Monaten für drei Monate in einem konventionellen Raum der Tierpflegeeinrichtung.

Histologische Einstufung von Darmkrebs.

Am Ende der dreimonatigen Behandlung wurden sowohl Dünndarm- als auch Dickdarmgewebe entnommen und der Länge nach geöffnet, gefolgt von vorsichtigem Ausspülen des Inhalts mit PBS. Insgesamt sechs Stücke (jeweils 2 cm lang) Darmgewebe von jeder Maus wurden gesammelt: drei aus dem Dünndarm an proximalen, mittleren und distalen Stellen; zwei aus dem Dickdarm an proximalen und distalen Stellen und einer aus dem Caecum. Alle Gewebe wurden in 10 % Formalin fixiert und in Paraffin eingebettet. Jeder Schnitt wurde mit Hämatoxylin und Eosin (HE) für die histologische Einstufung von Darmkrebs gefärbt. Die Einstufung der Krankheit erfolgte nach den pathologischen Merkmalen vonHyperplasie, Adenom oder Karzinom innerhalb jeder Probe, wie zuvor beschrieben (Engle et al., 1999) in einem Blindtestverfahren. Die Gesamtzahl jeder pathologischen Veränderung (Hyperplasie, Adenom und Karzinom) wurde in zwei Schnitten des Darmgewebes für jede Maus gezählt.

CistancheExtraktKann reduzierenEntzündlichHyperplasie

Nachweis von Helicobacter hepaticus (H. hepaticus) im Kot von Mäusen.

Um die Wirkung zu untersuchenCistancheExtraktauf das Wachstum pathologischer Mikroflora im Darm, H. hepaticus im Stuhl wurde durch Polymerase-Kettenreaktion (PCR) mit artspezifischen 16S-rDNA-Primern wie zuvor beschrieben bestimmt (Shames et al., 1995). Etwa 200 mg frischer Fäkalien wurden in 1 μl PBS gelöst und 30 min bei 50 Grad inkubiert, gefolgt von einer 10-minütigen Zentrifugation bei 8000 U/min. Der Überstand (200 ml) wurde gesammelt und mit einer gleichen Menge Proteinase-K-Lösung gemischt, die 5 Prozent (v/v) einer 18,7 mg/ml Proteinase-K-Lösung (Fermentas Canada, Burlington, ON, Kanada) in einem Verdauungspuffer (50 μM Tris-HCl, pH 8,0, 0,1 M EDTA, 0,5 % Natriumdodecylsulfat) und 30 min bei 70 °C inkubiert. Die DNA in der resultierenden Lösung wurde unter Verwendung des QIAprep Miniprep-Kits gemäß dem Protokoll des Herstellers (QIAGEN, Mississauga, ON, Kanada) extrahiert.
Die Polymerase-Kettenreaktions-Amplifikation bakterieller DNA wurde in einem Gemisch durchgeführt, das {{0}},75 μl 10-PCR-Puffer, 0,5 μl 50 mM enthielt MgCl2, 0,5 μL jedes Primers (Sense: 5'-GCA TTT GAA ACT GTT ACT CTG; Antisense: 5'-GGG GAGCUUGAAAACAG, jeweils 100 mM), 0,5 μL Taq-Polymerase, 18,75 μL nukleasefreies H2O und 1 μl nicht quantifizierte DNA-Lösung aus dem Stuhl. Das PCR-Gemisch wurde 5 min auf 94 Grad erhitzt, gefolgt von 40 Zyklen der Denaturierung bei 94 Grad für 1 Minute, Annealing bei 55 Grad für 1,25 Minuten und Verlängerung bei 72 Grad für 1,5 Minuten. Die PCR wurde durch einen Elongationsschritt von 10 min bei 72 Grad beendet. Das resultierende PCR-Produkt (25 &mgr;l) wurde einer Elektrophorese auf einem 1-prozentigen Agarosegel in Tris-Acetat-EDTA (TAE)-Puffer unterzogen, der 0,5 mg/ml Ethidiumbromid enthielt, und unter UV-Licht sichtbar gemacht.

Bestimmung von Makrophagen und natürlichen Killerzellen (NK).

Die Prozentsätze von Makrophagen und NK-Zellen in der Splenozytensuspension wurden durch fluoreszenzaktivierte Zellsortierungsanalyse (FACS) bestimmt. Eine Million Splenozyten in FACS-Puffer wurden mit einer geeigneten Antikörperkombination für verschiedene Phänotypen von Zellen in Eis inkubiert: Anti-CD3--Fluoresceinisothiocyanat (FITC) und Anti-CD49b-Phycoerythrin (PE) (BD Biosciences, Mississauga, ON, Kanada) für CD3 CD49b plus NK-Zellen und Ratten-Anti-Maus F4/80 plus als Primärantikörper und Anti-Ratten-IgG-FITC als Sekundärantikörper (eBioscience, San Diego, CA, USA) für F4/80 plus Makrophagen. Die Intensität der Fluoreszenz für jeden Zelltyp wurde unter Verwendung von Durchflusszytometrie gemessen und durch Vergleich mit Hintergrundkontrollen unter Verwendung der CELLQUEST-Software (BD Biosciences) analysiert.

Calcein-Acetoxymethyl (Calcein-AM)-Zytotoxizitätsassay.

Die lytische Aktivität von Effektor-Splenozyten gegen SW480-Zielzellen wurde durch einen Calcein-AM-Zytotoxizitätsassay unter Verwendung eines Kokultursystems, wie zuvor beschrieben (Neri et al., 2001), bewertet. Kurz gesagt, SW480-Zellen wurden mit dem Fluoreszenzfarbstoff Calcein-AM wie folgt markiert: 1 × 10⁶Zellen/ml SW480-Zellen in komplettem DMEM-Medium wurden mit 15 μM Calcein-AM bei 37 Grad unter gelegentlichem Schütteln inkubiert. Nach 30-minütiger Inkubation wurden die Zellen ausgiebig mit einem vollständigen DMEM-Medium gewaschen, um den extrazellulären Farbstoff zu entfernen. Die mit Fluoreszenzfarbstoff markierten SW480-Zellen in komplettem DMEM-Medium (0,2 x 10⁶Zellen/{{0}},25 ml/Well) wurden in 24-Well-Platten ausgesät. Basierend auf den unterschiedlichen Verhältnissen (12:1, 6:1, 3:1 und 1,5:1) von E (Effektor): T (Ziel), Splenozyten in 0,25 ml vollständigem RPMI-Medium pro Vertiefung wurden in dreifacher Ausfertigung zu den Vertiefungen mit den Zielzellen gegeben. Co-Kulturen wurden bei 37 Grad in 5 Prozent CO 2 für 24 Stunden inkubiert. Überstände wurden gesammelt, nachdem die Platte bei 2000 U/min für 5 min geschleudert wurde. Die Freisetzung von Calcein-AM in den Überstand wurde unter Verwendung eines Mikroplatten-Spektrofluorimeters (Fluoroskan Ascent FL, Thermo Labsystems) bei einer Emission von 527 nm unter Anregung bei 485 nm bestimmt. Die Zielzellen, die mit einer Mischung aus 0,25 ml vollständigem DMEM-Medium und 0,25 ml vollständigem RPMI-Medium inkubiert wurden, wurden als Hintergrund- oder Spontanfreisetzungskontrollen verwendet, und in Gegenwart von 2 % Triton X-100 wurde als verwendet maximale Freigabekontrollen. Die Zytotoxizität von Splenozyten wurde wie folgt berechnet:

Stickoxid (NO)-Messung. Aus den Zellen ausgeschiedenes Stickoxid wurde im Kulturmedium schnell zu Nitrit oxidiert. Daher wurden die Nitratkonzentrationen im Medium unter Verwendung der Griess-Methode als Maß für die NO-Produktion bestimmt. RAW264.7-Zellen (0.25 x 10⁶

Zellen/Well in 0,5 ml komplettem DMEM-Medium) in 24-Well-Platten wurden mit stimuliertCistancheExtrakt(50–200 mg/mL) und Lipopolysaccharid (LPS) (10 ng/mL) als Positivkontrolle. Nach 24-stündiger Behandlung wurden 50 ml Kulturüberstand zuerst mit 50 ml 1-prozentiger Lösung vermischt
Sulfanilamid in 5 %iger Phosphorsäure in 96--Well-Platten in dreifacher Ausfertigung und wurden für 1 0 Minute inkubiert, dann wurden 50 ml 0,1 %iges Naphthylethylendiamin-Dihydrochlorid in destilliertem Wasser pro Well zugegeben. Die Extinktion wurde nach 10-minütiger Inkubation bei 550 nm abgelesen, und der Gehalt an NO/Nitrit wurde unter Verwendung einer Standardkurve mit bekannten Natriumnitritkonzentrationen berechnet.

CistancheExtraktKann reduzierenEntzündlichHyperplasie

Westlicher Fleck.

Zelluläre Konzentrationen von Stickoxidsynthase II (NOS 2 oder iNOS) wurden durch Western Blot wie zuvor beschrieben untersucht (Du et al., 2006). Kurz gesagt wurden Proteinproben (ungefähr 100 mg/Probe) durch 7 % SDS-PAGE fraktioniert und auf die Nitrozellulosemembran übertragen. Die NOS-II-Proteinbanden wurden mit primärem polyklonalem Kaninchen-Anti-NOS-II-Antikörper (N-20) (1:500-Verdünnung; Santa Cruz Biotech, Santa Cruz, CA, USA) und sekundärem Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG-Antikörper ( 1:10000 Verdünnung; Vector Laboratory, Burlingame, CA, USA). Der NOS-II-Protein-Antikörper-Komplex wurde durch einen verstärkten Chemilumineszenz-Assay sichtbar gemacht (ECL, Amersham Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, England). Die Blots wurden unter Verwendung von Anti-b-Actin-IgG (Sigma-Aldrich Canada, Oakville, ON, Kanada) erneut untersucht, um das geladene Protein in jeder Probe zu bestätigen.

Phagozytose-Assay. Die Phagozytose wurde anhand der Menge an fluoreszenzmarkierten Latexkügelchen (SigmaAldrich Canada, L-3030, Carboxylat-modifiziert, durchschnittliche Größe 2 mm) gemessen, die von RAW264.7-Zellen verschlungen wurden, wie zuvor beschrieben (Wu et al., 2{{ 9}}07). Kurz gesagt, RAW264.7-Zellen (0,1 × 10 6 Zellen/0,5 ml/Vertiefung) in vollständigem DMEM-Medium wurden in 24--Vertiefungsplatten ausgesät und mit 100 mg/ml stimuliertCistancheExtraktoder komplettes DMEM-Medium nur als Kontrolle. Nach Stimulation über Nacht wurden 2,5 ml fluoreszierende Latexperlen pro Vertiefung zu den Makrophagenkulturen gegeben und für 2 Stunden inkubiert. Für die durchflusszytometrische Analyse wurden die Zellen durch Pipettieren nach dem Waschen in PBS abgelöst, und die Intensität der Fluoreszenz von Phagozytenzellen wurde mit einem Durchflusszytometer gemessen und durch Vergleich mit Hintergrundkontrollen (keine Kügelchen) unter Verwendung der CELLQUEST-Software (BD Biosciences) analysiert.

Statistische Analyse.

Die Daten wurden als Mittelwert plus Standardabweichung (SD) dargestellt. Eine Varianzanalyse (ANOVA) oder ein Student's t-Test wurde nach Bedarf durchgeführt, um die Daten zwischen den Gruppen zu vergleichen. Ein p-Wert von < 0,05="" wurde="" als="" signifikant="">

ERGEBNISSE

Behandlung mitCistancheExtraktverringert die Häufigkeit vonHyperplasieund H. hepaticus-Infektion des Darms Während der Behandlungsdauer (3 Monate) wurden das Körpergewicht und die Trinkwasseraufnahme einmal alle 2 Tage bei Mäusen der mit Extrakt behandelten Gruppe gegenüber der mit Vehikel behandelten Gruppe überwacht, wobei kein signifikanter Unterschied bestand notiert (Daten nicht gezeigt). Die histologische Analyse zeigte jedoch, dass die orale Verabreichung vonCistancheAuszügedie Anzahl deutlich reduziertentzündlichHyperplasieim Darm (Abb. 1), was durch die Tatsache belegt wird, dass Mäuse, die Wasser mit Extrakt erhielten, weniger hattenHyperplasie(5.00 plus -2.83/Maus, n=15) als diejenigen, die reines Wasser oder Fahrzeug trinken (7.53 plus -3.09/Maus, n {{9 }}) (Extrakt vs. Vehikel: p=0.0133, t-Test). Der Unterschied in der Anzahl von Adenomen und Karzinomen zwischen mit Extrakt und Vehikel behandelten Mäusen war statistisch nicht signifikant, da nur wenige Mäuse diese Stadien pathologischer Veränderungen aufwiesen (Daten nicht gezeigt).

Abbildung 1. Verringerung des Auftretens von Hyperplasie durch Behandlung mit Wasserextrakt von C. deserticola (CistancheExtrakt). Mäuse wurden mit Tgfb1 plus /-Rag2-/- gefüttertCistancheExtraktim Trinkwasser (Gruppe Extrakt) im Vergleich zu solchen mit reinem Trinkwasser (Gruppe Fahrzeug). Krebsartige Läsionen im Darm wurden histologisch mit einer H&E-Färbung untersucht. (A) Ein typisches Bild des gesunden Gewebeschnitts. (B) Ein typisches Bild der Hyperplasie im Abschnitt, angezeigt durch einen Pfeil. (C) Die Anzahl der Hyperplasien im Darm jedes Tieres wurde durch Histologie gezählt (p=0.0133, Extrakt versus Vehikel, n=15). Diese Abbildung ist in Farbe online unter wileyonlinelibrary.com/journal/ptr verfügbar

Es wurde gezeigt, dass Darmmikroben, insbesondere H. hepaticus-Infektionen, für die Entwicklung aller Stadien von Dickdarmkrebs einschließlich Hyperplasie in Rag2 erforderlich sind^-/- Mäuse (Engle et al., 2002; Erdman et al., 2003). Um zu prüfen, ob die Behandlung mitCistancheAuszügereduzierte pathologische Mikroflora im Darm, das Vorhandensein von H. hepaticus im Kot der behandelten MäuseCistancheExtraktwurde durch PCR im Vergleich zu Vehikelkontrollen bestimmt. In jedem Experiment wurden drei Mäuse pro Käfig mit Cistanche-Extrakt oder Vehikel behandelt. Die Kotproben wurden am Ende einer 14- Stunde über Nacht gesammelt, nachdem der Käfig gereinigt worden war. Wie in Fig. 2 gezeigt, wurde H. hepaticus 16S rDNA in den Fäzes effizient durch die PCR-Technik nachgewiesen. In drei separaten Experimenten (Tabelle 1) wurden nur 20–40 Prozent der Proben ausCistanche-Extrakt-behandelten Mäuse wurden als PCR-positiv erkannt, während 60–80 Prozent der Vehikelkontrollen positiv waren (Extrakt vs. Vehikel: p=0.0189, t-Test, n=3), was darauf hindeutet, dass die Behandlung mit Cistanche-Extrakt reduzierte die intestinale H. hepaticus-Infektion bei Mäusen.

Die Behandlung mit Cistanche-Extrakt erhöht die Anzahl der Milz-Makrophagen und NK-Zellen

Die Immunantwort spielt eine Schlüsselrolle bei der Eliminierung der Helicobacter-Infektion. Um zu prüfen, obCistanche ExtraktBehandlung das Immunsystem dieser zu Dickdarmkrebs neigenden Mäuse beeinflußte, wurde die Größe der Milz (12 Mäuse in jeder Gruppe) und die Anzahl der Milzzellen (sechs zufällig ausgewählte Mäuse aus jeder Gruppe) am Ende der Behandlung bestimmt. Die Milzen von 12 Mäusen in jeder Gruppe wurden gewogen, die anderen drei Mäuse im anfänglichen Experiment wurden nicht eingeschlossen. Wie in Tabelle 2 dargestellt,Cistanche-Extrakt-behandelte Mäuse (0.055 plus -0.022 g/Milz) waren schwerer als in der Vehikelgruppe (0.038 plus -0.01 g/Milz; Extrakt vs. Fahrzeug: p=0.04, t-Test). Diese Daten wurden weiter gestützt durch eine Zunahme der Anzahl von Splenozyten bei damit behandelten MäusenCistancheExtrakt, angegeben durch 7,095 plus -1,353 (x10⁶ Zellen/Milz) verglichen mit 2,941 plus -1,492 (x10⁶Zellen/Milz) Kontrollmäuse im Vehikel (Extrakt vs. Vehikel: p=0.002, t-Test).

Um weiter zu bewerten, obCistancheExtraktDie Behandlung beeinflusste einen bestimmten Subtyp von Splenozyten bei Mäusen, die Anzahl der NK-Zellen der Milz (CD3^-CD49b^PlusZellen) und Makrophagen (FT/80^PlusZellen) wurde durch FACS-Analyse gezählt. Der Prozentsatz von CD3^-CD49b^PlusZellen in den Splenozyten vonCistanche-Extrakt-behandelten Mäuse (32,06 plus -2,13 Prozent) unterschied sich nicht signifikant von dem in mit Vehikel behandelten Mäusen (28,47 plus -2,74 Prozent; Extrakt vs. Vehikel: p=0). 3741, t-Test, n=6), aber die Gesamtzahl der NK-Zellen in der Milz vonCistanche-Extrakt-behandelte Mäuse (2,22 plus - 0,44x10⁶/Milz) war höher als die Kontrollgruppe im Fahrzeug (0.83 plus -0.17x10⁶/Milz; Extrakt vs. Vehikel: p=0.01, t-Test, n=6; Abb. 3B). Ähnliche Ergebnisse wurden bei der Untersuchung von Milz-FT/80-Plus-Zellen beobachtet; wie in der Milz-NK-Zellpopulation, der Unterschied im Prozentsatz von Milz-FT/80-Plus-Zellen zwischen mit Extrakt behandelten Mäusen (35,25 plus -7,28 Prozent) und Vehikel-Kontrollmäusen (31,74 plus -5). 07 Prozent) war nicht signifikant (Extrakt vs. Vehikel: p=0.407, n=6), aber die Gesamtzahl der Milzmakrophagen in der mit Extrakt behandelten Gruppe (2,439 plus -0 .452x10⁶Zellen/Milz) war höher als in den Kontrollgruppen (1,114 plus -0,685x10⁶Zellen/Milz; Extrakt vs. Vehikel: p=0.001, t-Test, n=6; Abb. 3D). Zusammengenommen legen diese Daten nahe, dass die Behandlung mitCistancheExtraktkann die Gesamtzahl, aber nicht den Prozentsatz oder Anteil der Subtypen von Effektor-Splenozyten, NK-Zellen und Makrophagen in der Milz erhöhen.

Abbildung 3. Erhöhung der Anzahl von Milz-NK-Zellen und Makrophagen durch die Behandlung mitCistancheExtrakt. NK-Zellen oder Makrophagen in Splenozytensuspension wurden durch FACS-Analyse mit einer Kombinationsfärbung von FITC-anti-CD3e-Antikörper und APC-anti-CD49b/Pan-NK-Zellmarker (für NK-Zellen) oder mit einer einzelnen Färbung von FITC-anti- FT/80 (für Makrophagen). (A) Ein repräsentatives Diagramm des Prozentsatzes der Milz-NK-Zellen (CD3^-CD49b^Plus) in den Splenozyten von damit behandelten MäusenCistancheExtraktgegen Fahrzeug. (B) Die Gesamtzahl der NK-Zellen pro Milz. Die Daten werden als Mittelwert plus -SD in jeder Gruppe dargestellt (p= 0,01, n= 6). (C) Ein repräsentatives Diagramm des Prozentsatzes an Milz-Makrophagen (FT/80 plus) in den Splenozyten von damit behandelten MäusenCistancheExtraktgegen Fahrzeug. (D) Die Gesamtzahl der Makrophagen pro Milz. Die Daten werden als Mittelwert plus -SD in jeder Gruppe dargestellt (p= 0,001, n=6).

Die Behandlung mit Cistanche-Extrakt stimuliert die Splenozyten-Zytotoxizität in vivo und in vitro

Die Immunantwort hing nicht nur von der Anzahl der Splenozyten ab, sondern auch von ihrer Funktion, wie z. B. Zytotoxizität. Der Effekt vonCistancheExtraktBehandlung auf die Funktion von Splenozyten (dh Zytotoxizität) wurde in Kokulturen mit SW480-Zellen untersucht. Wie in Fig. 4A gezeigt, ist die Zytotoxizität von Splenozyten von mit behandelten MäusenCistancheExtraktwar höher als die von Zellen aus Vehikel-behandelten Mäusen, angezeigt durch 39,38 plus -2,64 Prozent Calcein-AM-Freisetzung in den Co-Kulturen von Extrakt-behandelten Splenozyten mit SW480-Zellen bei 6 :1 Verhältnis, 51,11 plus -2,6 Prozent bei einem Verhältnis von 3:1 und 57,33 plus -2,53 Prozent bei einem Verhältnis von 1,5:1, verglichen mit 27,75- 0,18 Prozent in den Kokulturen von Vehikel-behandelten Splenozyten mit SW480-Zellen bei einem Verhältnis von 6:1, 40,97 =-2,85 Prozent bei einem Verhältnis von 3:1 und 45,16 plus -0,18 Prozent bei a Verhältnis 1,5:1 (Extrakt vs. Vehikel: p < 0,0001,="" zweiweg-anova).="" zur="" weiteren="" bestätigung="" der="" stimulierenden="" wirkung="">CistancheExtraktauf Splenozyten-Zytotoxizität, die Zytotoxizität vonCistanche-Extrakt-behandelte naive Splenozyten von B6-Mäusen, die funktionelle T- und B-Zellen enthielten, wurden in Co-Kulturen mit SW480-Zellen untersucht. Wie in Fig. 4B gezeigt, wird die Hinzufügung vonCistancheExtrakt(100 mg/ml) erhöhte die Calcein-AM-Freisetzung in den Co-Kulturen in Abhängigkeit von Splenozyten signifikant: 57,64 plus -3,41 Prozent bei einem Verhältnis von 12:1, 52,25 plus { {11}},77 Prozent bei einem Verhältnis von 6:1 und 45,72 plus -2,43 Prozent bei einem Verhältnis von 3:1, verglichen mit 14,36 plus -0,05 Prozent bei einem Verhältnis von 12:1 , 20,67 plus -2,03 Prozent bei einem Verhältnis von 6:1 und 23,1 plus -3,73 Prozent bei einem Verhältnis von 3:1 in unstimulierten Kokulturen (Extrakt vs. Vehikel: p < 0,0001,="" zwei="" -weg-anova).="" darauf="" deuten="" diese="" ergebnisse="">CistancheExtraktstimuliert die lytische Aktivität von Splenozyten. Der Grund, warum weniger Zytotoxizität beobachtet wurde, wenn mehr Effektor-Splenozyten hinzugefügt wurden, ist unbekannt. Eine Möglichkeit war, dass das Ausmaß der Calcein-AM-Freisetzung in diesem Co-Kultursystem den Tod der Zielzelle möglicherweise nicht genau widerspiegelt, da das Calcein-AM nach einer langen Inkubationszeit von Effektor-Splenozyten reabsorbiert werden könnte.

Cistanche-Extrakt aktiviert Makrophagen

Die Aktivierung von Makrophagen ist eine der entscheidenden Immunantworten gegen Infektionen und Tumorentwicklung (Mantovani et al., 2002, 2008). Um weitere Einblicke in die Mechanismen zu offenbaren, durch dieCistancheExtraktBehandlung reduziert Darmhyperplasie und mikrobielle Inhalte, die Wirkung vonCistancheExtraktauf die NO-Produktion und Phagozytose von Makrophagen, RAW264.7-Zellen, untersucht. Wie in 5A gezeigt, wurde die Proteinexpression von NOS II in Kulturen nach Inkubation mit hochreguliertCistancheExtrakt. Diese Ergebnisse wurden weiter durch die Zunahme der NO-Produktion in bestätigtCistanche-Extrakt-stimuliertKulturen (Fig. 5B), belegt durch 3,88 plus -0,13 mM Nitrit in 50 mg/mlCistancheExtraktstimulierte RAW264.7-Zellkulturen verglichen mit 0.11 plus -0.12 mM Nitrit in unstimulierten Kontrollkulturen (Einweg-ANOVA, S<>

Phagozytose ist ein zellulärer Prozess, bei dem feste Partikel, wie Bakterien, verschlungen werden. Wie in Fig. 5C und D gezeigt, ist die Zugabe vonCistancheAuszügestimulierte Makrophagen-Phagozytose, wie durch mehr phagozytische Zellen (9,8 plus -0,1 Prozent) angezeigt, die in gefunden wurdenCistanche-Extrakt-stimulierte Makrophagenkulturen verglichen mit denen (5,2 plus -0,4 Prozent) in Vehikel-stimulierten Kulturen (Extrakt vs. Vehikel: p=0,0007, t-Test, n=3) nach 2 h Inkubation. Darauf deuten diese Daten hinCistancheExtraktkann Makrophagen durch Hochregulierung der lokalen NO-Produktion und Stimulierung der Makrophagen-Phagozytose im Darm von Mäusen direkt aktivieren.

DISKUSSION

Die vorliegende Studie zeigt zum ersten Mal, dass die orale Verabreichung vonCistancheExtraktreduziert signifikant die Häufigkeit von Hyperplasie und H. hepaticus-Infektionen im Darm von zu Dickdarmkrebs neigenden Mäusen. Die wohltuende Wirkung vonCistancheExtraktDie Behandlung ist mit einem Anstieg der Anzahl und Zytotoxizität von NK-Zellen und Makrophagen der Milz verbunden. In-vitro-Zugabe vonCistancheExtraktstimuliert die NO-Produktion und die Phagozytose in Makrophagen. TGF-b1-defizientes Rag2^-/-Es wurde gezeigt, dass Mäuse im Alter von 3 bis 6 Monaten Dickdarmkrebs (Hyperplasie, Adenom oder Adenokarzinom) entwickeln, und es wurde gezeigt, dass dies der Fall istentzündlichHerde sind immer mit diesen tumorigenen Läsionen assoziiert (Engle et al., 1999). Weitere Studien haben gezeigt, dass bei diesen Mäusen die Entwicklung von Dickdarmkrebs für das Vorhandensein der Infektion mit pathogener mikrobieller Flora erforderlich ist, da Dickdarmkrebs durch die Unterbringung von Mäusen unter keimfreien Bedingungen (Engle et al., 2002) und H. hepaticus vollständig eliminiert wird Infektion induziert auch Colitis und Dickdarmkarzinom in Rag2-/-Mäuse (Erdman et al., 2003). In ähnlicher Weise sind beim Menschen der mikrobiologische Status und die Wirtsimmunität die Schlüsselfaktoren für das Fortschreiten von IBD (Fiocchi, 1998), und es wurde berichtet, dass Magenkarzinom mit H. pylori-induzierter chronischer Infektion oder Entzündung assoziiert ist (Parsonnet et al., 1991; El-Omar und Malfertheiner, 2001). Die Ergebnisse dieser Studien deuten darauf hin, dass Magen-Darm-Infektionen eine entscheidende Rolle bei der Entstehung von Dickdarmkrebs spielen können. Daher kann das Zielen auf Magen-Darm-Infektionen zu einer therapeutischen Strategie zur Vorbeugung oder Behandlung von Dickdarmkrebs sowie IBD werden. Unsere Studie zeigt zum ersten Mal, dass die orale Verabreichung vonCistancheExtraktverringert die Häufigkeit vonentzündlichHyperplasieim Darm und die Anzahl von H. hepaticus im Kot von Mäusen mit TGF-b1-Mangel. Die wohltuende Wirkung vonCistanche Extraktkann auf die Aktivierung von Makrophagen zurückzuführen sein, was durch eine Zunahme sowohl der NO-Produktion als auch der Phagozytose nach der Behandlung mit zu sehen istCistancheExtrakt(Abb. 5), was die intestinale pathogene Mikroflora einschließlich Helicobacter einschränken kann (Mantovani et al., 2002, 2008). Infolgedessen wird die Läsion vonentzündlichHyperplasiewurde reduziert.

In den Extrakten von C. deserticola wurde eine Vielzahl bioaktiver Verbindungen identifiziert, darunter Phenylethanoidglykoside und Polysaccharide (Jiang und Tu, 2009). Die Phenylethanoidglykoside sind zytoprotektiv, was durch die Tatsache angezeigt wird, dass diese Verbindungen den Zelltod in kultivierten Hepatozyten und granulären Neuronen des Kleinhirns verhindern (Xiong et al., 1998; Pu et al., 2003). Während Polysaccharide die mitogeninduzierte Proliferation von T- und B-Lymphozyten stimulieren (Wu und Tu, 2005; Wu et al., 2005; Dong et al., 2007). Es ist gut dokumentiert, dass pflanzliche Polysaccharide die Immunantwort modulieren (Jiang et al., 2010).CistancheExtraktenthält 2–3 Prozent Phenylethanoide und 65–70 Prozent Polysaccharide, was darauf hindeutet, dass die immunmodulierende Wirkung vonCistancheExtraktDie Behandlung könnte auf die immunregulatorische Aktivität von Polysacchariden zurückzuführen sein, den meisten bioaktiven Substanzen im Cistanche-Extrakt. Seine Ziel-Immunzellen (z. B. Makrophagen oder NK-Zellen oder beides) und molekularen Signalwege erfordern jedoch weitere Untersuchungen. Darüber hinaus zeigt eine kürzlich durchgeführte Studie, dass die Verabreichung von pflanzlichem Phenylethanoidacetonid, einem der bioaktiven Phenylethanoide im Extrakt von C. deserticola (Xiong et al., 1996; Jiang und Tu, 2009), eine positive Wirkung auf die Reduzierung von Dextran hat Sulfat-Natrium-induzierte Kolitis bei Mäusen (Hausmann et al., 2007), was belegt, dass die Phenylethanoide (2–3 Prozent) in derCistancheExtraktkann zumindest teilweise zu seiner Wirksamkeit bei der Verringerung von beitragenentzündlichHyperplasie, die auch in Zukunft evaluiert werden muss.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Darmkrebs eine der am weitesten verbreiteten Krebsarten weltweit ist und in den meisten Fällen vermeidbar ist. Die Verwendung von ungiftigen Kräuterextrakten kann eine wirksame Strategie zur Verhinderung der Entwicklung von Darmkrebs bieten und kann auch als Chemo-Adjuvans angewendet werden, was der Steigerung der Wirksamkeit von Chemotherapeutika gegen Krebs und/oder der Verringerung des Chemotherapeutikums zugute kommen kann Nebenwirkungen. Die in dieser Studie präsentierten Daten zeigen deutlich, dass die Behandlung mit Wasserextrakt von C. deserticola die Hyperplasie und H. hepaticus-Infektion im Darm von zu Dickdarmkrebs neigenden Mäusen reduziert. Helicobacter-Infektion oder DarmEntzündungHyperplasieist ein Risikofaktor für die Entstehung von Darmkrebs. Unsere aktuelle Studie zeigt, dass die Verwendung dieses Krauts das Potenzial zur Vorbeugung und Behandlung von Darmkrebs haben kann, insbesondere für Personen mit IBD.

Wissen

YM wurde durch ein Graduiertenstipendium des China Scholarship Council unterstützt.

Interessenkonflikt

Die Autoren haben keinen Interessenkonflikt.

CistancheExtraktKann reduzierenEntzündlichHyperplasie

Aus: 'Reduktion vonEntzündlichHyperplasieim Darm von zu Dickdarmkrebs neigenden Mäusen durch Wasser-ExtraktCistanchedeserticola' von Yamin Jia,1,2 et al

---Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd. Phytother. Auflösung 26: 812–819 (2012) DOI: 10.1002/ptr.3637

VERWEISE

Burgdorf SK, Nielsen HJ, Rosenberg J. 2009. Immuntherapie bei Darmkrebs. Scand J Gastroenterol 44: 261–268.
Cai RL, Yang MH, Shi Y, Chen J, Li YC, Qi Y. 2010. The Antifatigue Activity of Phenylethanoid-rich Extract fromCistancheDeserticola. Phytother Res. 24: 313–315.
Chao A, Thun MJ, Connell CJ, et al. 2005. Fleischkonsum und Darmkrebsrisiko. JAMA 293: 172–182.
D. Cunningham, W. Atkin, H. J. Lenz, et al. 2010. Darmkrebs. Lanzette 375: 1030–1047.
Dong Q, Yao J, Fang JN, Ding K. 2007. Strukturelle Charakterisierung und immunologische Aktivität von zwei kaltwasserextrahierbaren Polysacchariden ausCistancheDeserticola YC. Ma. Carbohydr Res 342: 1343–1349.
Du C., Guan Q., Diao H., Yin Z., Jevnikar AM. 2006. Stickoxid induziert Apoptose in tubulären Nierenepithelzellen durch Aktivierung von Caspase-8. Am J Physiol Renal Physiol 290: F1044–1054.
Dubois M, Gilles KAJK, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F. 1956. Kolorimetrische Methoden zur Bestimmung von Zuckern verwandter Substanzen. Anal Chem 28: 350–356.

Eaden JA, Abrams KR, Mayberry JF. 2001. Das Risiko von Darmkrebs bei Colitis ulcerosa: eine Meta-Analyse. Darm 48: 526–535.
El-Omar EM, Malfertheiner P. 2001. Helicobacter pylori und Magenkrebs. Curr Opin Gastroenterol 17 (Ergänzung 1): S24-S27.
Engle SJ, Hoying JB, Boivin GP, ​​Ormsby I, Gartside PS, Doetschman T. 1999. Der transformierende Wachstumsfaktor beta1 unterdrückt nichtmetastasierenden Dickdarmkrebs in einem frühen Stadium der Tumorentstehung. Cancer Res. 59: 3379–3386.
Engle SJ, Ormsby I, Pawlowski S, et al. 2002. Elimination von Dickdarmkrebs in keimfreien Mäusen mit transformierendem Wachstumsfaktor Beta 1-. Cancer Res. 62: 6362–6366.
Erdman SE, Poutahidis T, Tomczak M, et al. 2003. CD4 plus CD25 plus regulatorische T-Lymphozyten hemmen mikrobiell induzierten Dickdarmkrebs bei Rag2--defizienten Mäusen. Am J. Pathol 162: 691–702.
Ferlay J, Shin HR, Bray F, Forman D, Mathers C, Parkin DM. 2010. Schätzungen der weltweiten Krebslast im Jahr 2008: GLOBOCAN 2008. Int J Cancer 127: 2893–2917.
Fiocchi C. 1998.EntzündlichDarmerkrankungen: Ätiologie und Pathogenese. Gastroenterologie 115: 182–205.
Hausmann M, Obermeier F, Papier DH, et al. 2007. Die In-vivo-Behandlung mit dem pflanzlichen Phenylethanoid Acteosid verbessert die Darmentzündung bei Dextransulfat-Natrium-induzierter Kolitis. Clin Exp Immunol 148: 373–381.
Jiang MH, Zhu L, Jiang JG. 2010. Immunregulatorische Wirkungen von Polysacchariden aus der chinesischen Kräutermedizin. Expertenmeinung Ther Targets 14: 1367–1402.
Jiang Y, Tu PF. 2009. Analyse chemischer Bestandteile inCistancheSpezies. J Chromatogr A 1216: 1970–1979.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR. 2002. Anti-nozizeptiv und anti-entzündlichAktivität verursacht durchCistancheDeserticola bei Nagern. J Ethnopharmacol 83: 177–182.
Lukas M. 2010.EntzündlichDarmerkrankungen als Risikofaktor für Darmkrebs. Dig Dis 28: 619–624.
Mantovani A, Allavena P, Sica A, Balkwill F. 2008. Krebsbedingte Entzündung. Natur 454: 436–444.
Mantovani A, Sozzani S, Locati M, Allavena P, Sica A. 2002. Makrophagenpolarisation: tumorassoziierte Makrophagen als Paradigma für polarisierte mononukleäre M2-Phagozyten. Trends Immunol 23: 549–555.
Neri S, Mariani E, Meneghetti A, Cattini L, Facchini A. 2001. Calcein-Acetoxymethyl-Zytotoxizitätsassay: Standardisierung einer Methode, die zusätzliche Analysen an gewonnenen Effektorzellen und Überständen ermöglicht. Clin Diagn Lab Immunol 8: 1131–1135.
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Wang YC. 2005. Improved production of phenylethanoid glycosides byCistancheDeserticola-Zellen, die in einem Airlift-Bioreaktor mit internem Kreislauf mit einem Sieb-Riser kultiviert wurden. Enzyme Microb Technol 36: 982–988.
Park Y, Hunter DJ, Spiegelman D, et al. 2005. Ballaststoffaufnahme und Darmkrebsrisiko: eine gepoolte Analyse prospektiver Kohortenstudien. JAMA 294: 2849–2857.
Parsonnet J., Friedman GD, Vandersteen DP, et al. 1991. Helicobacter pylori-Infektion und das Risiko eines Magenkarzinoms. N Engl J Med 325: 1127–1131.
Pu X, Song Z, Li Y, Tu P, Li H. 2003. Acteoside ausCistancheSalsa hemmt die Apoptose durch 1-Methyl-4-phenylpyridinium-Ionen in Kleinhirn-Körnerneuronen. Planta Med 69: 65–66.
Shames B, Fox JG, Dewhirst F, Yan L, Shen Z, Taylor NS. 1995. Identifizierung einer weit verbreiteten Helicobacter hepaticus-Infektion im Kot in kommerziellen Mauskolonien durch Kultur und PCR-Assay. J Clin Microbiol 33: 2968–2972.
Strate LL, Syngal S. 2005. Hereditäre Darmkrebssyndrome. Krebsursachenkontrolle 16: 201–213.
Von Roon AC, Reese G, Teare J, Constantinides V, Darzi AW, Tekkis PP. 2007. Das Krebsrisiko bei Patienten mit Morbus Crohn. Dis Colon Rectum 50: 839–855.
Wu TF, Hsu CY, Huang HS, Chou SP, Wu H. 2007. Die proteomische Analyse der Pycnogenol-Effekte in RAW 264.7-Makrophagen zeigt die Induktion der Cathepsin-D-Expression und die Verstärkung der Phagozytose. J. Agric Food Chem. 55: 9784–9791.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF. 2005. An arabinogalactan isolated from the stems ofCistanchedeserticola induziert die Proliferation von kultivierten Lymphozyten. Int. J. Biol. Macromol 37: 278–282.
Wu XM, Tu PF. 2005. Isolation and characterization of alpha-(1-->6)-Glucane ausCistancheDeserticola. J Asian Nat Prod Res 7: 823–828.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S. 1998. Hepatoprotective activity of phenylethanoids fromCistancheDeserticola. Planta Med 64: 120–125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T. 1996. Antioxidative Wirkungen von Phenylethanoiden ausCistancheDeserticola. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.