Interventionsforschung zu Phenylethylalkoholglycosiden in Cistanche am Tiermodell des perimenopausalen Syndroms Ⅱ

Experiment 1 Herstellung von Cistanche-Phenylethanoidglycosid 1 Quelle für medizinische Materialien

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, Chargennummer: 20130501.

2 Reagenzien

95 % Ethanol (medizinische Qualität); Makroporöses Adsorptionsharz AB-8, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, Chargennummer: 20130618.

Echinacosid-Referenzsubstanz, bereitgestellt vom China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Chargennummer: 111670-200503.3

WIE LANGE DAUERT ES, BIS CISTANCHE WIRKT?

Vorbereitungsmethode

Es wurde auf die Literaturmethode verwiesen [19] und unter der Leitung von Professor Feng Suxiang von der Abteilung für Arzneimittelanalyse des Henan College of Traditional Chinese Medicine durchgeführt.Cistanche mahlenzu einem groben Pulver verarbeiten, die 10-fache Menge an 70 %igem Ethanol zum Rückfluss hinzufügen und zweimal extrahieren, jeweils 1,5 Stunden lang, die beiden Alkoholextrakte kombinieren, unter reduziertem Druck konzentrieren, bis kein Alkoholgeruch mehr vorhanden ist, und dispergieren mit destilliertem Wasser (die Konzentration beträgt 0,5 g Arzneimittel/ml) als Probenlösung. Durch das AB-8-Harz laufen lassen (Säule Medikament:Harz beträgt 1:10), die Probe in einen Fluss geben und 5 Stunden stehen lassen, bis sie vollständig adsorbiert ist. Waschen Sie zunächst mit dem 10-fachen Säulenvolumen an destilliertem Wasser, verwerfen Sie das Wasser und verwenden Sie dann das 10-fache Säulenvolumen. Verwenden Sie 10 % Ethanol, um Verunreinigungen zu entfernen, und eluieren Sie schließlich mit dem 7-fachen Säulenvolumen von 60 % Ethanol. Sammeln Sie das Eluat und verdampfen Sie es zur Trockne, um ein Pulver zu erhalten. 4 Auswahl der Messwellenlänge

Messen Sie genau {{0}},5 ml der Referenzlösung ab, geben Sie 1 ml 5 %ige Natriumnitritlösung hinzu, schütteln Sie gut und lassen Sie es 6 Minuten lang stehen. 1 ml 10 %ige Aluminiumnitratlösung hinzufügen, gut schütteln und 6 Minuten stehen lassen; 10 ml 10 %ige Natriumhydroxidlösung hinzufügen, mit Wasser auf 25 ml verdünnen, gut schütteln und 18 Minuten stehen lassen, um als Referenzlösung zu dienen. 0,5 mlCistanche-PhenylethanolglycosidDie Lösung wurde auf die gleiche Weise wie die Testlösung hergestellt. Verwenden Sie die Parallelprobe ohne Zugabe der Referenzsubstanz, testen Sie die Lösung als Blindprobe und bereiten Sie die Blindlösung auf die gleiche Weise vor. Führen Sie mit dem UV-Spektrophotometer einen vollständigen Wellenlängenscan der oben genannten drei Lösungen im Wellenlängenbereich von 200-800nm durch. Sowohl die Referenzsubstanz als auch die Testlösung weisen maximale Absorptionsspitzen bei 507 nm auf, daher wird 507 nm als Absorptionswellenlänge bestimmt.

Nach Farbentwicklung der Cistanche-Phenylethanolglycosid-Probe + Farbentwicklung der Echinacea-Tangerine-Referenzsubstanz (überlagerter Vergleich), siehe Abbildung 1.

Abbildung 1 Nach Farbentwicklung der Probe des Phenylethanoidglycosids Cistanche + nach Farbentwicklung der Referenzsubstanz Echinacea Mandarine. Abbildung 5 Methode zur Bestimmung des Gehalts

Messen Sie 1 ml der zu testenden Lösung genau ab, geben Sie 1 ml 5 %ige Natriumnitritlösung hinzu, schütteln Sie gut und lassen Sie es 6 Minuten lang stehen; 1 ml 10 %ige Aluminiumnitratlösung hinzufügen, gut schütteln und 6 Minuten stehen lassen; 10 % Natriumhydroxid zugeben. Die Lösung beträgt 10 ml, mit Wasser auf 25 ml verdünnen, gut schütteln und 18 Minuten stehen lassen. Verwenden Sie die Parallelprobe ohne Zugabe von Probenlösung als Blindprobe und bereiten Sie auf die gleiche Weise eine Blindlösung vor. Gemessen mit einem UV-Spektrophotometer bei 507 nm. 6 Methodische Überprüfung

6.1 Vorbereitung von Referenzlösung und Probenlösung

Vorbereitung der Referenzlösung: 3,06 mg des bis zur Gewichtskonstanz getrockneten Echinacosid-Referenzstandards genau abwiegen, in einen 25-ml-Messkolben geben, 70 %ige Lösung zum Auflösen hinzufügen und bis zur Marke verdünnen. Gut schütteln und beiseite stellen. Die Standardkonzentration beträgt 0,1224 mg/ml.

Vorbereitung der Probelösung: 5 mg genau abwiegenCistanche-Phenylethanoidglycosid ExtraktIn einen 10-ml-Messkolben füllen, mit 70 %igem Ethanol auflösen und auf das Volumen verdünnen.

6.2 Vorbereitung der Standardkurve

Zeichnen Sie genau {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0 , 6,0 ml Referenzlösung, Farbe entwickeln und gemäß der Methode in 4.2 auf Volumen verdünnen und den Absorptionswert bei 507 nm messen. Unter Verwendung der Konzentration gegenüber der Absorption zur Erstellung einer Regressionskurve lautet die Regressionsgleichung: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994) und der lineare Bereich beträgt 4.{{ 23}}.4ug/ml.

6.3 Präzisionstest

Nehmen Sie die Probelösung und messen Sie diese sechsmal parallel gemäß dem Punkt „Methode zur Gehaltsbestimmung“. Berechnen Sie die relative Standardabweichung der Extinktion. Die Extinktionen betragen jeweils {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0.297. Die durchschnittliche Absorption=0.298, RSD=0.330 % (n =6).

6.4 Stabilitätstest

Nehmen Sie eine angemessene Menge der Probenlösung und messen Sie gemäß dem Punkt „Methode zur Bestimmung des Inhalts“ die Absorptionswerte bei {{0}}, 15, 30, 50 und 60 Minuten, nachdem die Lösung vollständig gefärbt ist, und berechnen Sie die relative Standardabweichung. Die Extinktionen betragen 0.304, 0,303, 0,300 bzw. 0,296. , 0,295, 0,295, durchschnittliche Absorption=0.299, RSD=1.362 % (n=5).

6.5 Wiederholbarkeitstest

Nehmen Sie eine Probe, bereiten Sie 6 Probenlösungen gemäß dem Punkt „Vorbereitung der Probenlösung“ vor, messen Sie den Absorptionswert gemäß dem Punkt „Methode zur Bestimmung des Gehalts“ und berechnen Sie den Gehalt. Die Gehalte betragen 65,2 %, 65,6 %, 66,7 %, 67,2 % bzw. 66,5 %. , 65,8 %, durchschnittlicher Inhalt 66,2 %, RSD=1.142 % (n=6).

6.6 Probenwiederherstellungstest

Nehmen Sie genau 0,5 ml der Probenlösung mit bekanntem Inhalt auf, insgesamt 9 Teile, und fügen Sie jeweils 200, 250 und 300 µl der Standardlösung hinzu. Messen und berechnen Sie die Wiederfindungsrate und die relative Standardabweichung von Cistanche-Phenylethanolglycosid. Die Wiederherstellungsraten betragen 101,45 % bzw. 99,26 %. , 98,94 %, 101,83 %, 99,05 %, 99,47 %, 98,72 %, 99,17 %, 100,64 %, die durchschnittliche Wiederherstellungsrate beträgt 99,84 %, RSD=1.164 % (n=9).

7 Bestimmung des Probeninhalts

Tabelle 1 Bestimmungsergebnisse des Phenylethanoidglycosidgehalts in Cistanche