Omega-3-Fettsäuren regulieren SIRT1/3 hoch, aktivieren PGC-1 durch Deacetylierung und induzieren die Nrf1-Produktion im 5/6-Nephrektomie-Rattenmodell

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Einführung

Nierensind an der Regulierung mehrerer Funktionen beteiligt, darunter verschiedene Stoffwechselwege, Wasser- und Elektrolythaushalt, Blutdruckkontrolle und die Produktion mehrerer Hormone. Da diese Funktionen enorme Energie verbrauchen,Nierensind reich an Mitochondrien [1]. Mitochondrien können sich an unterschiedliche Stoffwechselbedingungen anpassen, indem sie mechanistische Ziele von Rapamycin (mTOR) und AMP-aktivierte Proteinkinase (AMPK)-vermittelte Nährstofferfassungswege regulieren, um eine gesunde Mitochondrienpopulation aufrechtzuerhalten [2]. Unter den Studien zu Mitochondrien gibt es bisher nur wenige Studien zur mitochondrialen Biogenese. Die meisten Studien zur mitochondrialen Biogenese basieren auf nicht-Nieren-Gewebe [3,4] und Studien zuNierenbeziehen sich hauptsächlich auf AkutNierenverletzung(AKI) Tiermodelle, proximale Tubuluszellen und diabetische Nephropathie [5–7]. Obwohl die mitochondriale Biogenese möglicherweise mit der Pathogenese der mitochondrialen Dysfunktion bei nicht-diabetischen chronischen Erkrankungen in Verbindung stehtNierenerkrankung (CKD) ist die Forschung zu diesem Thema ebenfalls sehr begrenzt. CKD und mitochondriale Biogenese stehen im Zusammenhang mit Herz-Kreislauf-Erkrankungen [8,9]. Die Verbesserung der mitochondrialen Biogenese kann für die Kardioprotektion bei CKD von Vorteil sein. Eine Studie, die darauf hinweist, dass Omega-3-Fettsäuren (FAs) die Biogenese von Mitochondrien erleichtern, wurde unter Verwendung von nichtNiereGewebe [3,10]. Eine kürzlich durchgeführte Studie zeigte eine vielversprechende Rolle von Omega-3-FAs in der mitochondrialen Biogenese in Tiermodellen mit kardiovaskulären und neurodegenerativen Erkrankungen [11]. Daher wollten wir in der vorliegenden Studie die mitochondriale Biogenese in untersuchenNierenvon 5/6 Nephrektomie (Nx) Ratten. Zusätzlich bewerteten wir die Wirkung von Omega-3-FAs auf die mitochondriale Biogenese unter Verwendung dieses Modells.

Schlüsselwörter:Kernatmungsfaktor 1; Kernfaktor erythroider 2-verwandter Faktor 2; Sirtuin 1; Sirtuin 3; Omega-3-Fettsäure; Niere, Niere

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2. Ergebnisse

2.1. Veränderungen der Nierenfunktion und histologische Befunde

Im Vergleich zur Kontrollgruppe war der Blut-Harnstoff-Stickstoff (BUN)-Spiegel in den mit Omega{{0}} FA behandelten Nx- und Nx-Gruppen signifikant erhöht (Kontrollgruppe 17,7 ± 1,5, Nx-Gruppe 77,7 ± 28,4 und Tit mit Omega-3 FA-Gruppe 63,9 土 17,0 mg/dL, p = 0.{{20}}07). Obwohl es keinen signifikanten Unterschied zwischen den mit Omega-3-FA behandelten Nx- und Nx-Gruppen gab, waren die BUN-Spiegel in der mit Omega-3-FA behandelten Nx-Gruppe numerisch niedriger. Der Serumkreatininspiegel (sCr) war bei den drei Gruppen ähnlich dem von BUN (Kontrollgruppe, 0,4 th 0,U; Nx-Gruppe, 1,3 ± 0,6; Omega-3 FA, 1,0 ± 0,3 mg/dl; y=0,008). Im Vergleich zur Kontrollgruppe wurden bei der PAS-Färbung in der Nx-Gruppe eine schwere tubuläre Dilatation und Atrophie beobachtet (ergänzende Abbildung S1). Darüber hinaus zeigten die Ergebnisse, dass die mit omega-3 FA behandelte Nx-Gruppe weniger tubulointerstitielle Veränderungen aufwies als die Nx-Gruppe. DasNierenfunktionund histologische Veränderungen in den drei Gruppen wurden bereits in einer früheren Studie berichtet [12].

22 Änderungen der Faktoren im Zusammenhang mit der mitochondrialen Biogenese

2.2.1. Nrf1- und Nrf2-Ausdruck.Im Vergleich zur Kontrollgruppe zeigte die Nx-Gruppe ein signifikant verringertes Expressionsniveau des nuklearen respiratorischen Faktors 1 (Nefl) und des nuklearen Faktors Erythroid 2--bezogenen Faktors 2 (Nrf2). In der mit omega-3 FA behandelten Nx-Gruppe war das Expressionsniveau von Nrf1 und Nrf2 jedoch im Vergleich zur Nx-Gruppe signifikant erhöht, erreichte jedoch nicht das Niveau der Kontrollgruppe (Oigure P, ergänzende Abbildung St). . Diese Ergebnisse wurden auch in der quantitativen Echtzeit-PCR-Analyse der Nrf1-mRNA gefunden (ergänzende Abbildung S3).

2.2.3. Expression von Faktoren im Zusammenhang mit PGC-1-Aktivität: pAMPK, SIRT1/3.Im Vergleich zur Kontrollgruppe zeigten die mit Omega-3-Gruppen behandelten Nx und Nx signifikant niedrigere Spiegel an phosphoryliertem AMPK (das Verhältnis von Kürbis zu AMPK) (Abbildung 3A). Darüber hinaus zeigte die Nx-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe eine signifikant geringere Expression von Sirtuin 1 (SIRT1) (Abbildung 3B, ergänzende Abbildung S6). Nach der Zugabe von Omega-3-FA war die SIRT1-Expression jedoch relativ erhöht, aber dieser Unterschied war statistisch nicht signifikant. Diese Ergebnisse wurden in der quantitativen Echtzeit-PCR-Analyse von SIRT1-mRNA gefunden (ergänzende Abbildung S7). Umgekehrt war die Expression von Sirtuin 3 (SIRT3) in der Nx-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant verringert, was in der mit der Omega-3-FA-Gruppe behandelten Nx-Gruppe signifikant gerettet wurde (Abbildung 3C).

2.2.4. Keap1-, mTOR-, FoxO1- und FoxO3-Expression. Im Vergleich zur Kontrollgruppe war die Expression des Kelch-ähnlichen EC H-assoziierten Proteins 1 (Keap1) und der Forkhead-Box-Proteine ​​O1 und O3 (FoxO1/3) in der Nx-Gruppe signifikant erhöht . In der Nx-Gruppe, die mit der Omega-3-FA-Gruppe behandelt wurde, war das Expressionsniveau von Keap1 und FoxO1/3 im Vergleich zur Nx-Gruppe signifikant verringert (Abbildung 4C, E, F). Im Vergleich zur Kontrollgruppe war die Expression von mTOR in der Nx-Gruppe signifikant verringert. In der mit Omega-3-FA behandelten Nx-Gruppe wurde die mTOR-Expression jedoch gerettet, erreichte jedoch nicht das Niveau der Kontrollgruppe (Abbildung 4B).

2.2.5. Gehalt an mitochondrialer DNA (mtDNA). In der Nx-Gruppe wurde im Vergleich zur Kontrollgruppe eine signifikante Verringerung der mtDNA beobachtet. Die Reduktionsmenge an mtDNA wurde jedoch in der Nx-behandelten omega-3 Nx-Gruppe signifikant wiederhergestellt (ergänzende Abbildung S9).

3. Diskussion

PGC-1 , das durch Phosphorylierung und Deacetylierung aktiviert wird, ist der Hauptregulator der mitochondrialen Biogenese und Energieproduktion. Wir fanden eine Abnahme der Expression und Deacetylierung von PGC-1 im CKD-Modell. Es ist bemerkenswert, dass eine verringerte PGC-1-Deacetylierung der Hauptmechanismus ist, der zu einer dysfunktionalen mitochondrialen Biogenese und einer verringerten Energieproduktion bei CNI beiträgt. AMPK aktiviert PGC-1 durch Phosphorylierung seiner Threonin- oder Serinreste [13,14]. AMPK wird auch durch Phosphorylierung aktiviert, wenn das AMP/ATP-Verhältnis hoch ist. Es ist jedoch bekannt, dass AMPK bei CKD aufgrund der beeinträchtigten Wahrnehmung hoher AMP-Spiegel inaktiviert ist [15,16]. Ähnlich wie bei früheren Studien zeigten wir, dass die AMPK-Phosphorylierung in derNiereGewebe der Nx-Gruppe. Obwohl pPGC-1/PGC-1 in der Nx-Gruppe bis zu einem gewissen Grad erhöht zu sein scheint, ist es unwahrscheinlich, dass der Grad der PGC-1-Phosphorylierung aufgrund von verringertem PGC{{3) erhöht ist }} Ausdruck. Darüber hinaus zeigten die mit der Omega-3-FA-Gruppe behandelten Nx auch ähnliche Ergebnisse wie die der Nx-Gruppe, was darauf hindeutet, dass die Omega-3-FA-Verabreichung die Phosphorylierung von AMPK und PGC{{6} nicht beeinflusste. } . Deacetylierung kann in der gesamten Sequenz von PGC-1 auftreten, und SIRT1 und 3 spielen eine wichtige Rolle im Prozess der Deacetylierung [13,14]. Nach der Verabreichung von omega-3 FA stieg das Expressionsniveau von PGC-1 , SIRT1 und 3 an, was zur Rettung von deacetyliertem PGC-1 auf das gleiche Niveau wie das der normalen Kontrollgruppe führte . Die Wiederherstellung des Expressionsniveaus von Nrf1 und Nrf2, die in der mit Omega-3 FA behandelten Nx-Gruppe gezeigt wird, steht in direktem Zusammenhang mit der Erhöhung des Expressionsniveaus von SIRT1 und 3, was weiter zur Deacetylierung von PGC{ führte {22}} .

CISTANCHE WIRD DIE NIEREN-/NIERENFUNKTION VERBESSERN

Neuere Studien zu Mitochondrien inNierenerkrankunghaben gezeigt, dass sich die Erhöhung des PGC- 1- oder SIRT-Expressionsniveaus durch genetische oder pharmakologische Eingriffe verbessertNierenschädenin AKI-Tiermodellen [5–7,17,18]. Der zugrunde liegende Mechanismus umfasst die Wirkung einer Verbesserung der FA-Oxidation oder der antioxidativen Reaktion. Eine frühere Studie berichtete, dass die Verabreichung von Omega-3-FA die mitochondriale FA-Beta-Oxidation verbesserte und antioxidative Wirkungen in einem 5/6-Nx-Rattenmodell aufwies [19]. Es gibt auch Berichte, die darauf hindeuten, dass Omega-3 FA die Expression von PGC-1 , Nrf1 und SIRT1 in Muskelzellen, Makrophagen und Nervenzellen erhöht [3,10,11]. Da die Auswirkungen von Omega-3-FAs auf Mitochondrien in einem CNE-Modell noch nicht berichtet wurden, haben wir gezeigt, dass Omega-3-FA bei der Gewinnung von mitochondrialen Biogenese-verwandten Molekülen und mtDNA wirksam ist, indem wir ein CKD-Modell in diesem Modell verwendeten lernen.

Sowohl mTOR als auch AMPK sind an der mitochondrialen Biogenese beteiligt, ihre Rollen variieren jedoch je nach Ernährungszustand. mTOR, ein Ziel des Rapamycin-Komplexes 1 (mTOC1), kann durch Energiereize wie Aminosäure oder Glukose aktiviert werden und kann Signalwege auslösen, die zu anabolen Prozessen und mitochondrialer Biogenese führen. Umgekehrt kann AMPK durch Hypoxie und Ernährungsdefizite aktiviert werden, was zur Aktivierung des katabolischen Prozesses und der mitochondrialen Biogenese führt und den Energieverbrauch durch mTOC1 hemmt [2]. In dieser Studie zeigten wir nicht nur eine Abnahme von pAMPK/AMPK, sondern auch eine Abnahme von mTOR im CKD-Modell. Darüber hinaus führte die Omega-3-FA-Verabreichung zu einer annähernden Wiederherstellung der mTOR-Expression, jedoch zu keiner Wiederherstellung der Abnahme von pAMPK/AMPK. Daher könnten Omega-3-FAs die verringerte mitochondriale Biogenese lindern, indem sie die mTOR-Expression in erhöhenNiereneines CKD-Tiermodells. Es müssen jedoch weitere Studien durchgeführt werden, um zu klären, ob mTOR bei CNE-Patienten verringert ist und wie sich die Erhöhung der mTOR-Expression durch die Behandlung mit Omega-3 FA auf die mitochondriale Gesundheit und das Fortschreiten von CNE auswirkt.

FoxO1 und 3 binden an den PGC-1-Promotor und verstärken dessen Transkription [20,21]. In dieser Studie wurde jedoch festgestellt, dass FoxO1 und 3 in der Nx-Gruppe erhöht und in der Kontroll- und Nx-Gruppe, die mit Omega-3-FA behandelt wurde, erniedrigt waren. Daher wird angenommen, dass die Expression von FoxO1 und 3 für die kompensatorische Reaktion zur Verringerung von PGC-1 bei CNI oder zur Erhöhung von PGC-1 durch Omega-3-FA-Verabreichung relevant ist. Nrf2 spielt eine wichtige Rolle bei der zellulären Redox-Homöostase und der mitochondrialen Biogenese. Es gibt drei Ubiquitin-Ligase-Systeme, die mit dem Abbau von Nrf2 in Verbindung stehen (Keap1, -Transducin-Repeats-enthaltendes Protein und E3-Ubiquitin-Ligase synovial) [22]. In dieser Studie zeigten wir eine signifikante Abnahme von Nrf2 und eine signifikante Zunahme von Keap1 in der Nx-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe.d In der mit Omega-3-FA behandelten Nx-Gruppe wurde jedoch die Expression von Keap1 gefunden zu verringern und Nrf2 wurde erhöht. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass die verbesserte antioxidative Wirkung der Omega-3-FA-Verabreichung im CNE-Rattenmodell mit der Abnahme der Keap1-Expression und dem Nrf2-Abbau zusammenhängen könnte, was die mitochondriale Biogenese verbessern könnte. Basierend auf den in dieser Studie erzielten Ergebnissen ist weitere Forschung erforderlich, um die kausale Beziehung zwischen FoxO1/3 und Nrf2 in der CNE-Umgebung und die Wirkung der Omega-3-FA-Verabreichung aufzuklären.

CISTANCHE WIRD NIEREN-/NIERENINFEKTIONEN VERBESSERN

Das Molekulargewicht von Nrf2 wurde in dieser Studie und anderen neueren Studien bei 68 Kilodalton (kDa) gefunden [23,24]. Frühere Studien zeigten jedoch, dass ein biologisch relevantes Molekulargewicht von Nrf2 95–110 kDa beträgt [25,26]. Wir fanden auch Banden, die als biologisch relevantes Nrf2 vermutet wurden (ergänzende Abbildung S8). Weitere Studien sind notwendig, um das Molekulargewicht des biologisch wichtigen Nrf2 herauszufinden. In früheren Studien wurden die Veränderungen in den Mitochondrien am 28. Tag nach 5/6 Nx berichtet, die auf eine Abnahme der Gen- oder Proteinexpression im Zusammenhang mit Beta-Oxidation, oxidativer Phosphorylierung und Strukturprotein der inneren Membran hindeuteten, aber es gab kein Ergebnis verwandt mit PGC-1-Ausdruck [27,28]. In dieser Studie bestätigten wir, dass mitochondriale Biogenese-verwandte Moleküle und mtDNA, die die mitochondriale Biogenese widerspiegeln, während des chronischen Stadiums moduliert wurden, da die Veränderungen am 45. Tag nach 5/6 Nx bei Ratten beobachtet wurden. Trotz der histologischen und biologischen Verbesserungen führte die Omega-3-FA-Behandlung nicht zu einer funktionellen Wiederherstellung vonNierenim Vergleich zum Nx-Modell. Daher ist weitere Forschung erforderlich, um zu bestimmen, ob Omega-3-Fettsäuren bei der Wiederherstellung wirksam sindNierenfunktiondurch Induzieren von Wirkungen, die die mitochondriale Funktion verbessern könnten. Es gibt mehrere Einschränkungen in dieser Studie. Erstens haben wir die Aktivität der Citratsynthase und die Superoxidbildung in der mitochondrialen Atmungskette nicht bewertet. Zweitens haben wir nicht experimentiert, welche FA-Komponenten von Omacor hauptsächlich auf mitochondriale Biogenese-verwandte Moleküle wirken. Drittens haben wir keinen klaren Mechanismus zur Verbesserung der mitochondrialen Biogenese-verwandten Moleküle aufgezeigt. Wir vermuten lediglich, dass die entzündungshemmende Wirkung, die den oxidativen Stress und die Omega--3-Fettsäure selbst als metabolische Verbindungen reduziert, mit dem Mechanismus zusammenhängen könnte.

4. Materialien und Methoden Mitochondriale Biogenese

4.1. Tiere und experimentelles DesignDie Studien wurden an männlichen Sprague-Dawley-Ratten (9- Wochen alt) durchgeführt, die von Japan SLC, Inc. (Shizuoka, Japan) bezogen wurden. Alle Ratten wurden entweder einer Scheinkontrolle oder 5/6 Nx unterzogen. Alle Verfahren mit Tieren wurden in Übereinstimmung mit der Genehmigung des Institutional Animal Care Committee der Dong-A University (DIACUC-14-4) durchgeführt. Die Ratten wurden unter Standardbedingungen gehalten und hatten freien Zugang zu Leitungswasser und einer Standarddiät. Alle Ratten wurden den folgenden Gruppen zugeordnet: Gruppe 1 (Scheinkontrolle, n=6), Kontrollratten, die auf Kochsalzlösung gehalten wurden (1 ml/kg/Tag durch Magenspülung); Gruppe 2 (Nx-Gruppe, n=6), Nx-Ratten, die auf Kochsalzlösung gehalten wurden (1 ml/kg/Tag durch Magenspülung); Gruppe 3 (Omega-3-FA-Gruppe), Nx-Ratten, die mit Omega-3-FAs behandelt wurden. Die Dosis und der Verabreichungsweg von Omega-3-FAs (Omacor, 300 mg/kg/Tag durch Magensonde, Pronova Biocare, Sandefjord, Norwegen) wurden basierend auf früheren Studien bestimmt [19]. Omacor ist aus dem Meer stammendes Omega-3-FA und besteht aus 460 mg Eicosapentaensäure (EPA) und 380 mg Docosahexaensäure (DHA) in 1 g Omacor. Omacor wird in der Regel zur Sekundärprävention nach Myokardinfarkt und Hypertriglyzeridämiebehandlung verschrieben [29]. Zwei Omega--3-Fettsäuren (EPA plus DHA) sind Haupt- (84 Prozent) und aktive Bestandteile von Omacor, die pharmazeutisch hergestellt werden

Kompositionen, die kleinere Komponenten überwinden (16 Prozent). Wir entschieden uns für Omacor als Nahrungsergänzung mit Omega-3 FA mit entzündungshemmender Wirkung und Reduzierung von oxidativem Stress, weil es das Risiko von Herz-Kreislauf-Erkrankungen in den klinischen Studien senkte [30]. Die Ratten wurden gleichmäßig gefüttert und ihr Gewicht wurde täglich beobachtet. Den Ratten wurde für 15 Wochen nach der Operation freier Zugang zu Leitungswasser gewährt und sie wurden dann unter Diethylether-Anästhesie eingeschläfert. Beim Tod wurde eine Blutprobe aus der Aorta entnommen und dann 10 Minuten lang bei 3000 U/min zentrifugiert. Um Änderungen zu erkennen inNierenfunktion, BUN- und sCr-Werte wurden unter Verwendung eines automatischen Analysators (Roche, Deutschland) gemessen.

4.2. Histopathologische Untersuchung.FormalinfixiertNiereGewebe wurden in Paraffin eingebettet, in Scheiben geschnitten (4 &mgr;m) und mit Periodsäure-Schiff gefärbt. Histopathologische Veränderungen wurden mit Aperio ScanScope (Aperio Technologies, Vista, CA, USA) beobachtet.

4.3. RNA-Isolierung und quantitative Echtzeit-PCR-Analyse.Gesamt-RNA wurde daraus extrahiertNiereGewebe mit TRIzol-Reagenz. Dann wurde 1 &mgr;g Gesamt-RNA unter Verwendung des M-MLV-cDNA-Synthesekits (Enzynomics, Daejeon, Korea) in einzelsträngige cDNA umgewandelt. Primer wurden aus entsprechenden Gensequenzen unter Verwendung von Primer3 und mfold-Software entworfen. Für die quantitative Echtzeit-PCR-Analyse wurde die cDNA einer PCR-Amplifikation unter Verwendung genspezifischer Primer unterzogen: Ratte PGC1 50- CCG AGA ATT CAT GGA GCA AT-30(sense), 50- GTG TGA GGA GGG TCA TCG TT-30 (Antisense); Ratte Nrf1 50- GTT TCA TGG ACC CAA GCA TT-30(Sinn), 50- GGT GGC CTG AGT TTG TGT CT-30(Antisense); Ratte SIRT3, 50- GAG ACT TGG TGG GGT CCT TT -30 (Sinn), 50- ATC CTG CAG CTC TTG TGT CC -30 (Antisense); Ratte SIRT1, 50- CAG GTT GCA GGA ATC CAA AG -30 (Sinn), 50- CTC CAC GAA CAG CTT CAC AA -30 (Antisense); Ratte - Aktin, 50- GCG CAA GTA CTC TGT GTG GA -30 (Sinn), 50- CAT CGT ACT CCT GCT TGC TG -30 (Antisense). Echtzeit-PCR wurde unter Verwendung von SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) mit einem ABI 7500-Gerät (Applied Biosystems, Waltham, MA, USA) durchgeführt.

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4.4. Western Blotting und Immunpräzipitation.Western Blotting wurde wie zuvor beschrieben mit leichten Modifikationen analysiert [10].NiereGewebe wurden durch Lysepuffer (PRO-PREP-Proteinextraktionslösung) homogenisiert, inkubiert (30 min bei 4 ◦C) und zentrifugiert (14,000 rpm für 20 min bei 4 ◦C). Die Proteinkonzentration wurde mit dem Bradford-Protein-Assay-Reagenz (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) bestimmt. Die gleiche Proteinprobe wurde auf eine 7,5–15-prozentige SDS-PAGE geladen und auf eine Nitrozellulosemembran (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, USA) übertragen. Dann wurden Proteine ​​mit jedem Antikörper immungeblottet. Antikörper gegen PGC-1 und SIRT1 wurden von Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA) bezogen. Antikörper gegen AMPK, pAMPK, Nrf1, SIRT3, FoxO1, FoxO3a und mTOR wurden von Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA) erworben. Antikörper gegen Nrf2, Keap1 (Monomer) und -Actin wurden von Abcam (Cambridge, MA, USA) und Sigma (St. Louis, MO, USA) bezogen. Für die Immunpräzipitation wurden insgesamt 500 µg Protein mit PGC-1-Antikörpern (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) und Protein A/G plus Agarose-Beads (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) inkubiert. USA) und über Nacht bei 4 °C mischen gelassen. Die Immunpräzipitate wurden dann unter Verwendung von SDS-PAG-Elektrophorese getrennt und unter Verwendung der Acetyl-Lysin- (Cell Signalling Technology, Beverly, MA, USA) und Phosphoserin- (MerckMillipore, Burlington, MA, USA) Antikörper immungeblottet. Die Membranen wurden anschließend mit Meerrettichperoxidase-konjugiertem Sekundärantikörper für 60 min bei Raumtemperatur inkubiert. Die Proteinspiegel wurden durch -actin (ImageJ Version 1.48q) standardisiert. Western-Blotting und Immunpräzipitationsanalyse mit Antikörpern wurden mit dem verstärkten Chemilumineszenzsubstrat Super Signal West Pico (Thermo Scientific, Hudson, NH, USA) durchgeführt und mit LAS-3000 Plus (Fuji Photo Film, Tokio, Japan) nachgewiesen.

4.5 Messung des mtDNA-GehaltsMittels qPCR wurde der relative Gehalt an mtDNA bestimmt. Die Reaktion wurde mittels SYBR-Green-Chemie unter Verwendung von 3 ng Gesamt-DNA als Matrize und den folgenden Primern durchgeführt: Ratten-mtDNA 5'-GGTTCTTACTTCAGGGCCATCA-3' (Sinn), 5,-TGATTAGACCCGTTACCA TCGA-3' ( Antisense); Ratten-p-Aktin, 5'-CCCAGCCATGTACGTAGCCA (Sinn), C-CGTCTC-CGGAGTCCATCAC f (Antisense). Der mtDNA-Gehalt relativ zur Kern-DNA wurde in [31] angegeben.

4.6 Statistische AnalyseStatistische Analysen wurden unter Verwendung der Software SPSS 18.0 (IBM Corp., Armonk, NYP USA) durchgeführt. Die Ergebnisse werden als Mittelwert 土 SD ausgedrückt. Die Mittelwerte für die Gruppen wurden durch Varianzanalyse verglichen, gefolgt von Mehrfachvergleichen nach Tukey. p e 0.05 wurde als statistisch signifikant betrachtet.

5. Schlussfolgerungen

Abschließend wurden signifikante Modulationen in der Expression von Mediatoren im Zusammenhang mit der mitochondrialen Biogenese in einem CNE-Rattenmodell beobachtet. Omega-3 FA kann die mitochondriale Biogenese verbessern, indem es Nrf1 und Nrf2 hochreguliert. Dieser Schutzmechanismus kann durch eine Erhöhung der PGC-1-Expression und eine Deacetylierung von PGC-1 initiiert werden, die durch eine erhöhte SIRT1/3-Produktion ausgelöst wurde (Abbildung 5). Abbildung 5. Wirkung von Omega-3-FA auf die mitochondriale Biogenese bei CKD. Fettgedruckte schwarze Pfeile zeigen die Expression von Mediatoren im Zusammenhang mit der mitochondrialen Biogenese in einem CNE-Rattenmodell. Rote Pfeile zeigen die Expression von Mediatoren nach Omega-3-FA-Verabreichung. Pfeile nach oben/unten zeigen eine Zunahme und Abnahme der Expression von Mediatoren an.