Hautbezogene Eigenschaften und Inhaltsstoffe aus dem oberirdischen Teile-Extrakt von Persicaria Senticosa

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Yun-Hyeok Choi, 1 Jae Yeon Lee, 2 Ji Eun Lee, 1 Yeon Woo Jung, 1 Wonsik Jeong, 1 Seong Su Hong, 1 Young-Rak Cho, 2 und Chun Whan Choi 1

1. Einleitung

Persicaria senticosaist eine einjährige Pflanze aus der Familie der Polygonaceae, die in ganz Korea verbreitet ist. Seit jeher wird diese Pflanze als Volksmedizin mit wohltuenden Wirkungen zur Behandlung verschiedener Krankheiten wie Entfernung der anschwellenden Wundteile oder Karbunkel und Zellulitis sowie zur Blutzirkulation und zur Beseitigung von Blutstauungen eingesetzt. Das haben neuere Studien gezeigtPersicaria senticosahatte entzündungshemmende Wirkungen [1]; Diese Pflanze wurde jedoch nicht als bioaktiver kosmetischer Inhaltsstoff gemeldet. Und frühere phytochemische Studien an den Blüten, Stängeln und Wurzeln der Gattung Polygonum haben verschiedene Flavonoide und phenolische Verbindungen wie Hydroxybenzoesäure, Rutin, Quercetin-3-O-Glucuronid, Quercetin-3-O-Glucosid und Luteolin-7-O-Rutinosid wurden als die Hauptwirkstoffe angesehen [2, 3]. Diese Wirkstoffe zeigen vielfältige pharmakologische Wirkungen, wie z. B. entzündungshemmende, ulkushemmende, blutdrucksenkende und krebshemmende Wirkungen [4]. Während des Screenings auf kosmetische Inhaltsstoffe durch Messen der Radikalfängerwirkung auf 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH), ABTS-Radikalfänger, Elastasehemmung,TyrosinaseHemmung und Stickoxid-Assay wurde festgestellt, dass mehrere Polygonum-Extrakte eine starke Aktivität zeigen.

Klicke umCistanche wird zur Verringerung der Tyrosinase-Aktivität verwendet.

2. Materialien und Methoden

2.1. Pflanzenmaterialien und allgemeine Verfahren von Naturprodukten.

Persicaria senticosawurde in Seo-myeon, Chuncheon-si, Gangwon-do, Korea, in 2016 gesammelt (GPS: N 37 Grad 55′ 30,1″, E 127 Grad 37′ 57,0″, Höhe: 434 m). Belegexemplare (G071) wurden von Dr. Chun Whan Choi authentifiziert.Persicaria senticosawurden im Herbarium des Biocenter, Gyeonggido Business & Science Accelerator, Suwon, Südkorea hinterlegt (Abb. S3). Der 99,9-prozentige Methanolextrakt von 34 Polygonum wurde von der Korea Plant Extract Bank am Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (Daejeon, Korea) erhalten. 1 H- und 13 C-NMR-Experimente wurden auf einem Bruker Ascend 700 MHz-Spektrometer mit Tetramethylsilan (TMS) durchgeführt. LC-ESI-MS wurde auf einem Triple TOF 5600 plus-Instrument (AB SCIX, USA) und HRESI-MS auf einem LTQ Orbitrap XL-Instrument (Thermo, USA) erhalten. Dünnschichtchromatographie (TLC) wurde auf Silicagel 60F254 (Merck, Deutschland) und Silicagel 60 RP-18 F254S (Merck, Deutschland) Platten durchgeführt. Säulenchromatographie (CC) wurde unter Verwendung von Kieselgel 60 (70~230 Mesh, Merck, Deutschland), ODS-A (12 nm S-7 μm, YMC GEL, Japan) und präparative HPLC wurde auf LC{{ 23}}A (Shimadzu, Japan).

2.2. NO-Assay.

RAW 264.7-Zellen wurden in Platten mit 96- Vertiefungen (5 × 104 Zellen/Vertiefung) ausgesät und 1 Stunde lang mit einer Probe behandelt, bevor sie 24 Stunden lang mit LPS (1 ug/ml) stimuliert wurden. Die Negativkontrolle wurde mit serumfreiem Medium behandelt. Die Menge an Nitrit, einem stabilen Metaboliten von NO, wurde unter Verwendung von Griess-Reagenz (1 Prozent Sulfanilamid und 0,1 Prozent Naphthylethylendiamindihydrochlorid in 2,5 Prozent Phosphorsäure) gemessen. Die Extinktion wurde anschließend bei 540 nm unter Verwendung eines ELISA-Lesegeräts gemessen. Die Nitratmenge wurde aus einer Standardkurve für Natriumnitrit bestimmt [5–7].

2.3. Zell-Zytotoxizitäts-Assay.

RAW 264.7-Zellen wurden mit einer Dichte von 5 × 10 4 Zellen/Vertiefung in Platten mit 96- Vertiefungen ausplattiert. Die Zellen wurden 1 h lang mit Proben behandelt, bevor sie 24 h lang mit LPS (1 ug/ml) stimuliert wurden. MTT (5 mg/ml in PBS) wurde zu jeder Vertiefung gegeben und für 2 h inkubiert. Das Medium wurde aus den Vertiefungen durch Absaugen entfernt, DMSO wurde zu jeder Vertiefung gegeben und die Platte geschüttelt. Die Extinktion jeder Vertiefung wurde bei einer Wellenlänge von 540 nm unter Verwendung eines ELISA-Lesegeräts gemessen. Die Daten sind als Mittelwert ± Standardabweichung von drei Wiederholungen dargestellt.

2.4. DPPH Radikalfänger-Aktivitätsassay.

Die radikalfangende Aktivität von DPPH wurde unter Verwendung des von Blois [8] und Ozgen et al. [9]. In Methanol gelöste DPPH-Lösung wurde zu der Probe gegeben, die auf die erforderliche Konzentration verdünnt wurde, und die Reaktion wurde 30 Minuten lang bei Raumtemperatur durchgeführt. Die Absorption wurde bei 517 nm unter Verwendung eines ELISA-Lesegeräts gemessen. Als Positivkontrolle wurde das Antioxidans Butylhydroxyanisol (BHA) verwendet und der IC50-Wert der Probe bestimmt.

2.5. ABTS Radikalfänger-Aktivität.

Die Radikalfängeraktivität von ABTS wurde unter Verwendung eines zuvor beschriebenen Verfahrens gemessen [10, 11]. ABTS plus wurde durch Mischen von 7 mM ABTS-Lösung und 2,45 mM Kaliumpersulfat (K2S2O8)-Lösung mit ABTS:K2S2O8 (Verhältnis 2:1) für 12–16 h zur Bildung eines Kations (ABTS plus) gebildet. Die Extinktion wurde bei 734 nm unter Verwendung eines ELISA-Lesegeräts gemessen. BHA, ein Antioxidans, wurde als positive Kontrolle verwendet.

2.6. Tyrosinase-Hemmtest.

Tyrosinasedie inhibitorische Aktivität wurde unter Verwendung des von Yagiet al. [12]. Die Reaktion wurde in 0,1 M Kaliumphosphatpuffer (pH 6,5) durchgeführt, der 1,5 mM L-Tyrosin und 1250 Einheiten/ml Pilztyrosinase enthielt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei 37 Grad inkubiert. Die Testproben wurden auf Tyrosinase-Hemmung getestet, indem ihre Wirkung gemessen wurdeTyrosinaseAktivität unter Verwendung des SpectraMax 190PC-Mikroplatten-ELISAreaders bei 490 nm. Als Positivkontrolle wurden Arbutin und Kojisäure verwendet und der IC50-Wert der Probe bestimmt.

2.7. Elastase-Hemmtest.

Die Reaktion wurde in {{0}},5 mM Tris-Puffer (pH 8,5) durchgeführt, der 1 mg/ml N-Succinyl-(Ala)3-p-Nitroanilid und 0,6 Einheiten/ml Elastase enthielt . Das Reaktionsgemisch wurde 10 min bei 25 Grad inkubiert. Die Testproben wurden auf Elastase-Hemmung getestet, indem ihr Effekt auf Elastase-Aktivität unter Verwendung eines ELISA-Lesegeräts bei 405 nm gemessen wurde. Als Positivkontrolle wurde Ursolicacid verwendet und der IC50-Wert der Probe bestimmt [13].

2.8. Statistische Analyse.

Die statistische Analyse der Daten wurde mit der PRIZM5-Software (GraphPad, CA, USA) durchgeführt, und die Daten sind als Mittelwert ± Standardabweichung dargestellt. Der einseitige Student-t-Test wurde zur Analyse der Signifikanz der Differenz zwischen den Gruppen verwendet, und P < 0:05="" wurde="" als="" statistisch="" signifikant="">

3. Ergebnisse und Diskussion

3.1. Hautbezogene Eigenschaften von Pflanzenextrakten in der Familie Polygonaceae.

Radikalfängerwirkung auf DPPH, Radikalfänger ABTS, Elastasehemmung,TyrosinaseEs wurde festgestellt, dass Hemmung und Stickoxid-Assay bei mehreren Polygonum-Extrakten eine starke Aktivität zeigen. Die Ergebnisse zeigten, dass Persicariajaponica und Rumex longifolius den NO-Assay (IC{{0}}.3and unter 25,0 ug/mL haben. Für DPPH betrug der IC50 des Methanolextrakts von Polygonum ciliinerve, Polygonum alpinum und Persicaria Chinensis 36,9, 15,4 bzw. 19,2 ug/ml. Bei der ABTS-Radikalfängeraktivität betrug der IC50 des Methanolextrakts von Polygonum cuspidate und Polygonum alpinum 5,2 bzw. 5,3 ug/ml. ImTyrosinaseIn Bezug auf die inhibitorische Aktivität betrug der IC50 des methanolischen Extrakts von Polygonum sachalinensroot und Polygonum cuspidata 289,0 bzw. 483,9 ug/ml. Im Elastase-Hemmungstest wurde der IC50 des methanolischen Extrakts von Polygonum sachalinense, Polygonum cuspidatum, Persicaria hydropiper, Persicaria sieboldi, Polygonumorientale, Persicaria lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Rumexacetosella, Rumex Crispus, Polygonum alpinum, Persicarialongiseta, Persicaria Chinensis, Persicaria japonica, Persicariaviscera, Persicaria conspicua, Rheum palmatum und Persicaria lapathifolia lag unter 100 ug/ml (Tabelle 1).

3.2. Hautbezogene Eigenschaften von Persicaria senticosa-Fraktionen.

Radikalfänger-Effekt auf 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH), ABTS-Radikalfänger, Elastase-Hemmung und Stickoxid-Assay auf mehrerePersicaria senticosaFraktionen zeigten starke Aktivität. Die Ergebnisse zeigten, dass die CH2Cl2- und EtOAc-Fraktionen den NO-Assay aufweisen (unter 25 bzw. 44,64 ug/ml). Die DPPH- und ABTS-Radikalfängeraktivitäten der EtOAc-Fraktionen betrugen 13,7 und 5,0 ug/ml. Im Elastase-Hemmtest lag die IC50 von n-Hexan- und CH2Cl2-Fraktionen unter 100 ug/ml (Tabelle 2).

3.3. Isolierung und Bestimmung von Verbindungen aus Persicaria senticosa-Extrakt.

Persicaria senticosaLuftteile (1,4 kg), im Schatten getrocknet und pulverisiert, wurden zu 4{{10}} L aus 70-prozentigem Ethanol (HPLC-Qualität) gegeben und zweimal bei Raumtemperatur (jeweils für 2 Tage) und wurden im Vakuum bei 4 0 Grad konzentriert, um 180,4 g Extrakte zu ergeben. Die Extrakte wurden in destilliertem Wasser suspendiert und dann mit n-Hexan (4:0 l × 3), CH2Cl2 (4:0 l × 3), EtOAc (4:0 l × 3) und n-Butanol (4:0 l × 3) aufgetrennt. um n-Hexan (11,7 g), CH 2 Cl 2 (7,4 g), EtOAc (21,7 g), Butanol (22,5 g) und wasserlösliche Fraktionen (110,1 g) zu ergeben (Schema 1). Die EtOAc-Fraktion (21,7 g) wurde durch MPLC getrennt, die Gradientenmischungen als Elutionsmittel verwendete (F001-003). Die Verbindungen 1 (3,2 mg) und 5 (3,9 mg) wurden aus F002 isoliert, die durch präp-HPLC verwendet wurden. Die Fraktion F001 wurde durch MPLC getrennt, das Gradientenmischungen als Elutionsmittel (F011-F018) verwendete. Verbindung 6 (1,5 mg) wurde aus F016 isoliert, das durch präparative HPLC verwendet wurde. Verbindung 7 (2,7 mg) wurde aus F017 isoliert, das durch präparative HPLC verwendet wurde. F012 wurde unter Verwendung von MPLC getrennt, das Gradientenmischungen als Elutionsmittel verwendete (F121-F124). Verbindung 4 (10,8 mg) wurde aus F124 isoliert, das durch präparative HPLC verwendet wurde. Außerdem wurde F014 durch präparative HPLC unter Verwendung von Gradientenmischungen als Elutionsmittel (F141-F143) getrennt. Verbindung 3 (2,3 mg) wurde aus F141 unter Verwendung von präparativer HPLC isoliert. Verbindung 2 (4,8 mg) wurde aus F142 unter Verwendung von semipräparativer HPLC isoliert. Die Reinigung der EtOAc-löslichen Schicht wurde durch Säulenchromatographie-Trennung und MPLC-Analyse zu den Verbindungen 1-7 durchgeführt. Es wurde identifiziert als Loliolid (1) [14], Quercetin-3-O-Glucosid (2) [15], Quercetin-3-O-Glucuronid (3) [16], 4-Methoxy Caftrarsäure (4) [17], Kämpferol-3-(6-methylglucuronid) (5) [18], Quercetin-3-(6-methylglucuronid) (6) [19, 20] und Quercetin (7) [21]. Die Struktur wurde durch eine Kombination aus 1D- und 2D-NMR- und MS-Spektrometrie sowie durch einen Vergleich mit bekannter Literatur aufgeklärt (Abbildung 1).

3.4. Hautbezogene Eigenschaften von Verbindungen aus Persicariasenticosa.

Radikalfängerwirkung auf DPPH,TyrosinaseHemmung und Stickoxid-Assay auf mehrere Verbindungen ausPersicaria senticosaEs wurde festgestellt, dass es eine starke Aktivität zeigt (Abb. S4–7). Die Ergebnisse zeigten, dass Verbindung 7 den NO-Assay (IC50 29,7 ug/ml) aufweist. Für DPPH betrug der IC50 der Verbindungen 2, 3, 5 und 7 39,6, 31,2, 37,0 bzw. 22,7 ug/ml. Bei der Tyrosinase-Hemmaktivität betrug die IC50 von Verbindung 7 14,3 ug/ml (Tabelle 3).

4. Schlussfolgerung

Persicaria senticosaist eine einjährige Pflanze aus der Familie der Polygonaceae, die in ganz Korea verbreitet ist. Seit jeher wird diese Pflanze als Volksmedizin mit wohltuender Wirkung zur Behandlung verschiedener Krankheiten eingesetzt. Diese Studie bewertete hautbezogene Eigenschaften und Bestandteile des Luftteilextrakts von Persicaria senticosa und vierunddreißig Polygonaseae-Pflanzen. Im Zuge des Screenings nach kosmetischen Inhaltsstoffen wurde durch Messung der Radikalfängerwirkung auf DPPH, ABTS Radikalfänger, Antifalten mittels Elastase-Hemmung, Whitening untersuchtTyrosinaseHemmung und entzündungshemmende wurde auf Stickoxid-Assay getestet. Es wurde festgestellt, dass mehrere Polygonum-Extrakte eine starke Aktivität aufweisen. Die Ergebnisse zeigten, dass der Extrakt aus Persicaria senticosamethanolic DPPH- und ABTS-Radikalfängeraktivitäten aufweist (IC50 61.0 und 17,5 ug/ml). Im Elastase-Inhibitionsassay und Stickoxid-Assay betrug die IC50 des Methanol-Extrakts von Persicaria senticosa 241,5 ug/ml bzw. 71,8 ug/ml. Der 70-prozentige ethanolische Extrakt von Persicaria senticosa wurde mit n-Hexan, CH 2 Cl 2 , EtOAc, n-BuOH und wässrigen Fraktionen verteilt.

Die in EtOAc lösliche Fraktion zeigte eine starke hautbezogene Aktivität (Fig. 2 und Tabelle 3). Diese Ergebnisse legten nahe, dass aktive Komponenten inPersicaria senticosadie für die hautbezogene Aktivität verantwortlich sind, wurden in der EtOAc-löslichen Fraktion von Persicaria senticosa konzentriert (Schema 1). Andererseits zeigten die in n-Hexan, Dichlormethan lösliche Fraktion und die BuOH-lösliche Fraktion, die aus dem Extrakt von Persicaria senticosa stammten, eine gleich starke Aktivität in Bezug auf Stickoxid-Assay, DPPH und ABTS-Radikalfängeraktivität, während die verbleibende Wasserfraktion schwache inhibitorische Wirkungen zeigte (Tabelle 2 ).

Somit wird eine Bioassay-geführte Reinigung von drei aktiven Fraktionen, dh der EtOAc-löslichen Fraktion vonPersicaria senticosawurde durchgeführt, um die aktiven Prinzipien zu reinigen, die für die hautbezogene Aktivität verantwortlich sind, gefolgt von dem in Schema 1 beschriebenen Verfahren.

Die Reinigung der in EtOAc löslichen Schicht ausPersicaria senticosaEin 70-prozentiger ethanolischer Extrakt wurde durch Säulenchromatographie-Trennung und MPLC-Analyse zu den Verbindungen 1-7 durchgeführt. Es wurde als Loliolid (1), Quercetin3-O-Glucosid (2), Quercetin-3-O-Glucuronid (3), 4-Methoxycaftarinsäure (4), Kaempferol{{ 11}}(6-Methylglucuronid) (5), Quercetin-3-(6-Methylglucuronid) (6) und Quercetin (7). Die Struktur wurde durch eine Kombination aus 1D- und 2D-NMR- und MS-Spektrometrie sowie Vergleich mit bekannter Literatur aufgeklärt (Abb. S2). Radikalfängerwirkung auf 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH),TyrosinaseHemmung, und es wurde festgestellt, dass ein Stickoxid-Assay bei mehreren Verbindungen von Persicaria senticosa eine starke Aktivität zeigt. Die Ergebnisse zeigten, dass Verbindung 7 den NO-Assay (IC5029,7 μM) aufweist. Für DPPH betrug die IC50 der Verbindungen 2, 3, 5 und 7 39,4, 32,1, 37,0 bzw. 22,7 μM. ImTyrosinaseIn Bezug auf die inhibitorische Aktivität betrug der IC50-Wert von Verbindung 7 14,3 μM. Wie in Abbildung 3 gezeigt, sind die Verbindungen 2 und 5 die Hauptverbindungen in der EtOAc-löslichen Fraktion von Persicaria senticosa (-Abb. S1). Und die Verbindungen 2 und 5 zeigten eine hervorragende antioxidative Aktivität (Abbildung 4), was mit früheren Studien übereinstimmt [18, 22].

Das hat die vorliegende Studie gezeigtPersicaria senticosaund Polygonaseae enthalten chemische Verbindungen mit Warenhaut-bezogenen Aktivitäten und könnten als neue Quelle bioaktiver Wirkstoffe für die Kosmetikindustrie interessant sein.