Synergistische Anti-Haut-Pigmentierungseffekt von Cistanchen-Phenylethanoidglycosiden und Glabridin
Jan 14, 2025
Zusammenfassung, um die synergistischen Untersuchungen zu untersuchenAuswirkung von CistanchePhenylethanolseite (PHGs) und Glabridin (GLA) gegen die Hautpigmentierung, das Massenverhältnis von PHGs und GLA wurde durch In -vitro -Tyrosinase -Hemmungsexperiment, 1, 1- Diphenyl -2- Trinitrophenylhydrazin (Dppheny) und DPPH) und DPPH) und DPPH) und DPPH) und gescreent 2, 2- Diazo-Bis (3- Ethyl-benzothiazol -6- Sulfonsäure Diammonium Cation (ABTS+) FREE RADICAL SCAVENGING-Experimente Inhalt als Indizes.
DerentzündlichDas durch Lipopolysaccharid (LPS) induzierte Modell von Hacat-Zellen wurde hergestellt, und die entzündungshemmende Wirkung des Arzneimittels wurde durch Hemmung der Freisetzung von Interleukin -6 (il {-6) und Tumornekrosefaktor (TNF-) bewertet. Das durch Azodiisobuamidinhydrochlorid (AHAPH) induzierte oxidative Stressmodell von Hakatzellen wurde weiter etabliert, und die verstärkte Aktivität der Superoxiddismutase (SOD) und Katalase (CAT) wurde als Indizes verwendet, um die Antioxidationswirkung des Arzneimittels zu bewerten. Das optimale Massenverhältnis von PHGS und GLA wurde durch die obigen drei Zellmodelle bestimmt. Die Ergebnisse zeigten, dass wässrige Lösungen von PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) und PHGS/GLA (10∶1) mit M (PHGS) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1 eine gute Hemmungs- und synergistische Wirkung auf die Tyrosinase -Aktivität und die Antioxidantaktivität und die Antioxidantaktivität und die synergistischen Aktivität aufwiesen. Die Hemmraten von PHGS/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) und PHGS/GLA (1 0 ∶1) wässrige Lösungen mit einer Massenkonzentration von 0,4 g/l betrugen 94,37%, 92,93%bzw. 88,06%. Die Abgasquoten von DPPH -freien Radikalen betrugen 89,44%, 88,72,%bzw. 88,10%.
Die Abgasquoten von ABTS+ freien Radikalen betrugen 1 0 0,13%, 100,0,1%bzw. 99,87%. Wenn die Massenkonzentration von PHGS/GLA 25 ug/ml betrug, zeigten wässrige Lösungen von PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) und PHGS/GLA (10∶1) keine Zytotoxizität zu B16F10- und Hacat -Zellen. Die Hemmung der Tyrosinaseaktivität in der wässrigen PHGS/GLA (1 ∶1) war stärker (Tyrosinaseaktivität 23,80%), und der Melaningehalt (30,90%) verringerte sich signifikant. Die wässrige Lösung von PHGS/GLA (1∶1) zeigte den besten Hemmungseffekt auf IL -6 und TNF- Freisetzung und die Fähigkeit, die Aktivität von SOD und CAT zu verbessern. Die Kombination von PHGS und GLA zeigte eine gute synergistische Leistung, überlegen A bis Einzelmedikamente und höher als PHGS/ GLA (5∶1) und PHGS/ GLA (10∶1) wässrige Lösung. Die Kombination von PHGS und GLA spielte eine synergistische Rolle bei der Verbesserung der Hautpigmentierung durch Hemmung der Melaninproduktion und der entzündungshemmenden und antioxidativen Wirkungen.
Schlüsselwörter Cistanche Phenylethanoidglykoside; Glabridin; synergistische Effekte; Anti-Haut-Pigmentierung; Antioxidierung; entzündungshemmend; Drogenmaterialien
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Hautpigmentierung ist eine Hautkrankheit, die durch Faktoren wie Verletzungen, Hautentzündungen und ultraviolette Strahlung verursacht wird [1-2]. Diese Faktoren können zu einem abnormalen Anstieg des Melanins führen, was wiederum Probleme wie Chloasma, Sommersprossen und postinflammatorische Hyperpigmentierung (PIH) [3-4] verursacht, was sich auf den mentalen Zustand und die Lebensqualität der Menschen auswirkt. Derzeit konzentriert sich die Behandlung der Hautpigmentierung hauptsächlich auf die Hemmung von Tyrosinase, einem Schlüsselenzym bei der Bildung von Melanin [5-6].
Die neueste Forschung [7-8] zeigt, dass die Hautpigmentierung von der engen Verbindung zwischen Keratinozyten und Melanozyten in der Epidermis abhängt. Sobald die von Keratinozyten freigesetzten freien Radikalen und entzündlichen Faktoren mit Melanozyten in Kontakt kommen, werden sie zu einer Zunahme der Tyrosinaseaktivität führen, was zu einem Anstieg des Melaningehalts führt. Sie beschleunigen auch den Melanintransport und veranlassen Melanin, sich auf der Hautoberfläche abzulegen. Daher erfordert die Behandlung der Hautpigmentierung eine Vielzahl von Maßnahmen wie die Hemmung der Melaninproduktion, entzündungshemmende und Antioxidation.
Obwohl traditionelle Arzneimittelpräparate wie Hydrochinon und Hydrochinon bestimmte Wirkungen bei der Behandlung der Hautpigmentierung aufweisen, sind ihre Wirkmodi relativ einzeln und können unerwünschte Reaktionen erzeugen [9-10]. Im Vergleich dazu sind natürliche Medikamente natürlich und mild und werden von den Verbrauchern zunehmend erkannt und gelobt [11-12]. Insbesondere kann die Kombination mehrerer Pflanzenextrakte [13-14] nicht nur die Produktion von Melanin hemmen, sondern auch mehrere Effekte wie entzündungshemmende und antioxidative Wirkungen aufweist und neue Ideen und Methoden zur Behandlung von Hautpigmentierung liefert.
Cistanche Deserticola MA hat einen einzigartigen medizinischen Wert und ist als "Desert Ginseng" bekannt. Studien haben herausgefunden, dass das in Cistanche enthaltene charakteristische Phenylethanoidglykosid eine gute antioxidative Aktivität [15] und entzündungshemmende Wirkungen [16] und auch eine bestimmte Tyrosinase-inhibitorische Wirkung [17] aufweist. Glycyrrhazin ist eine Flavonoidkomponente in Glycyrrhiza Glabra L., die einen starken Aufweicheneffekt hat und als "Whitening Gold" bekannt ist [18]. Die traditionelle chinesische Medizinbehandlung der Hautpigmentierung beginnt normalerweise, die Milz und Niere zu fördern, die Hitze zu beseitigen und zu entgiften und Qi und Blut wieder aufzufüllen [19].
Phenylethanolische Glykoside von Cistanche Deserticola können die Niere Yang wieder auffüllen und Essenz und Blut profitieren, während Glycyrrhiza Glabra Milz und Qi wieder auffüllen kann, die Hitze entfernen und entgiftet. Die beiden können zusammenarbeiten, um der Pündung zu widerstehen. Die Kombination von Phenylethanoid -Glykosiden von Cistanche Deserticola und Glabridin kann der Hautpigmentierung vor mehreren Dimensionen und Zielen widerstehen, vor ultravioletten Strahlen im gesamten Band schützen. In der Literatur gibt es jedoch nur wenige Berichte über die synergistische Hemmung der Hautpigmentierung durch Phenylethanoidglykoside von Cistanche Deserticola und Glabridin.
In diesem Artikel soll untersucht werden, ob es einen synergistischen Effekt zwischen Pphenylethanoidglycosiden von Cistanche Deserticola (PHGs) und Glabridin (GLA) durch In -vitro -biochemische Experimente und die Etablierung von 3 Zellmodellen und das optimale Verbindungsmassenverhältnis für eine synergistische Wirkung gibt. Es wird erwartet, dass es theoretische Unterstützung und praktische Anleitung für die Entwicklung natürlicher Pflanzenhautpflegeprodukte bietet und die Hautpflegeindustrie fördert, um sich in natürlicherer, gesünderer und effizienterer Richtung zu entwickeln.
Wo: Eine Reaktion ist die Absorption von Probenlösung, L-Tyrosinlösung, PBS und Tyrosinase-Lösung; Eine Reaktionskontrolle ist die Absorption von Probenlösung, L-Tyrosinlösung, N- und PBS-Lösung; Eine Blanke ist die Absorption der L-Tyrosin-Lösung, der PBS-Lösung und der Tyrosinase-Lösung; Eine leere Kontrolle ist die Absorption von L-Tyrosin- und PBS-Lösungen.
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1.3.2 Bestimmung der DPPH -Fähigkeit zur frequen Radikale
First, accurately weigh {{0}}.0197 g (0.05 mmol) of DPPH and dissolve it in 250 mL of anhydrous ethanol to prepare a DPPH working solution with a concentration of 0.2 mmol/l. Dann wurden PHGs und GLA in PHGS -Ethanollösung und GLA -Ethanollösung mit Massenkonzentrationen von 0. 0 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml mit 50% Ethanol nach Volumen und VC Ethanol -Lösung auf derselben Lösung hergestellt. Dann wurden die PhGS -Ethanollösung und die GLA -Ethanollösung bei M (PHGS -Lösung) ∶ M (GLA -Lösung) gleichmäßig gemischt=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40, um 9 Arten von PHGS/GLA -Ethan -Solutionen zu erhalten. (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Ethanollösungen. Schließlich geben Sie 100 μl unterschiedliche Probenlösungen und 100 μl DPPH -Arbeitslösung zur Bohrlochplatte {96- Brunnenplatte, mischen Sie gut und halten Sie sich 30 Minuten lang bei Raumtemperatur von Licht fern. Messen Sie die Absorption bei 517 nm mit einem Enzymmarker. VC wurde als positive Kontrolle verwendet und jedes Experiment wurde dreimal wiederholt. Berechnen Sie die DPPH Free Radical Scavenging Rate (%) gemäß der Formel (2).
DPPH Free Radical Scavenging Rate/%=(1 - 𝐴1 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2) wobei: A1 die Absorption der Probenlösung + DPPH -Arbeitslösung ist; A2 ist die Absorption von 50% Ethanol nach Volumen + DPPH -Arbeitslösung; A3 ist die Absorption der Probenlösung + 50% Ethanol nach Volumen.
1.3.3 Bestimmung der ABTS+ FRAVE RADICAL ABSCHABEN -Fähigkeit
Wiegen Sie zunächst 1 g (1,82 mmol) ABTS und lösen Sie es in entionisiertem Wasser auf, um eine ABTS -Arbeitslösung mit einer Endkonzentration von 7,4 mmol/l herzustellen. Wiegen Sie 0. 5 g Kaliumpersulfat und lösten Sie es in entionisiertem Wasser auf, um eine Kalium -Persulfat -Arbeitslösung mit einer Endkonzentration von 2,6 mmol/l vorzubereiten. Mischen Sie die ABTS -Arbeitslösung und die Kalium -Persulfat -Arbeitslösung in gleichen Volumina und reagieren Sie 12 Stunden im Dunkeln, um die ABTS+ -arbeitslösung vorzubereiten. Nach der Methode in Abschnitt 1.3.2 PHGS -Ethanollösung, GLA -Ethanollösung, N- und VC -Ethanollösung sowie PHGs/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Ethanollösung herstellen.
Schließlich 40 & mgr; l verschiedener Probenlösungen und 160 & mgr; l ABTS+ Arbeitslösung zur 96- -Bellplatte, gut mischen, bei Raumtemperatur im Dunkeln für 6 Minuten reagieren und die Absorption der Lösung bei 734 nm mit einem ELISA -Leser messen. Berechnen Sie die ABTS+ Free Radical Scavenging Rate (%) gemäß der Formel (3).
Wo: A1 die Absorption der Probenlösung + ABTS + Arbeitslösung; A2 ist die Absorption von entionisiertem Wasser + ABTS + Arbeitslösung; A3 ist die Absorption der Probenlösung + entionisiertes Wasser.
1.4 Zellversuche
1.4.1 Zellkultur
Nachdem B16F10 und Hacat-Zellen wiederbelebt wurden, werden sie in ein DMEM-Hochglucose-Medium (mit einer Mischung aus 10% fetalem Rinderserum und 1% Penicillin-Streptomycin durch eine Massenfraktion) inokuliert und in einem Inkubator bei 37 Grad, 5% CO2-Volumenfraktion und 70% Feuchtigkeit für 24 Stunden kultiviert. Der Zellwachstumsstatus wird unter einem Mikroskop beobachtet und das Medium entsprechend dem Zellwachstumsstatus ersetzt oder subkultiviert.
1.4.2 Experimentelle Gruppierung
B16F10- und HACAT -Zellen in der logarithmischen Wachstumsphase werden in 96- Wellplatten mit geeigneten Zellzahlen inokuliert und 24 Stunden kultiviert, damit die Zellen an der Wand haften können. Probenlösungen verschiedener Massenkonzentrationen werden unter Verwendung eines DMEM -Kulturmediums hergestellt. The normal group, model group, low-dose PhGs (125 ug/mL) group, medium-dose PhGs (250 ug/mL) group, high-dose PhGs (500 ug/mL) group, low-dose Gla (6.25 ug/mL) group, medium-dose Gla (12.5 ug/mL) group, high-dose Gla (25 ug/mL) group, and PhGs/Gla (1∶1) group, PHGS/GLA (5∶1) -Gruppe und PHGS/GLA (10∶1) Kulturmediumgruppe wurden eingerichtet.
In dem UVB-induzierten B16F10-Pigmentierungsmodell wurden die Modellgruppenzellen mit 30 & mgr; l PBS (ph =7. 4) zugegeben und 3 cm direkt unter dem UVB-Bestradior für 110 s platziert; Die experimentelle Gruppe wurde 1 h mit 100 & mgr; l Probenlösungen verschiedener Massenkonzentrationen vorbehandelt, dann mit 30 & mgr; l PBS hinzugefügt und 3 cm direkt unter dem UVB -Bestradior für 110 s platziert; Die normale Gruppe verwendete immer Hochglucose-DMEM-Kulturmedium; Die leere Gruppe wurde nicht mit Zellen inokuliert, sondern stattdessen mit einer gleichen Menge an Kulturmedium.
In dem LPS-induzierten Hacat-Zell-Entzündungsmodell wurde die Modellgruppe 24 Stunden lang mit einer PBS-Lösung von LPS in einer Konzentration von 20 ug/ml kultiviert; Die experimentelle Gruppe wurde 24 h mit 100 & mgr; l Probenlösungen verschiedener Massenkonzentrationen vorbehandelt und dann 24 h mit 20 ug/ml LPS -Lösung hinzugefügt; Die normale Gruppe verwendete immer Hochglucose-DMEM-Medium; Die leere Gruppe wurde nicht mit Zellen inokuliert, sondern mit einer gleichen Menge an Kulturmedium.
In dem AHAPH-induzierten Hacat-Zell-oxidativen Stressmodell wurde die Modellgruppe 24 h mit einer Lösung von 100 ml Aaphs (2,5 mmol) bei einer Konzentration von 25 mmol/l kultiviert; Die experimentelle Gruppe wurde 24 h mit 100 & mgr; l Probenlösungen verschiedener Massenkonzentrationen vorbehandelt und dann 24 h mit AAPH -Lösung zugegeben. Die normale Gruppe verwendete immer Hochglucose-DMEM-Medium; Die leere Gruppe wurde nicht mit Zellen inokuliert, sondern mit einer gleichen Menge an Kulturmedium.
Jede Gruppe wurde mit 3 Replikatbohrungen eingerichtet und in einem Inkubator mit 37 Grad, 5% CO2 -Volumenfraktion und 70% Feuchtigkeit kultiviert.
1.4.3 Zytotoxizitätstest
Die CCK8 -Methode wurde verwendet, um die Zytotoxizität zu bestimmen. B16F1 0 und HACAT -Zellen in der logarithmischen Wachstumsphase wurden 3 min mit 0,25% Trypsin verdaut. Nach der Beendigung der Verdauung wurde das Kulturmedium wiederholt geblasen, um eine Zellsuspension mit einer Dichte von 1 × 104 Zellen/ml zu machen. Die Zellen wurden gleichmäßig in einer {96- -Wellplatte, 100 μl pro Vertiefung, inokuliert und PBS wurde den Brunnen um die Zellen zugesetzt. Nachdem die Zellen an der Wand eingehalten hatten, wurden verschiedene Massenkonzentrationen der Probenlösung zugegeben, 3 Replikatbohrungen pro Gruppe und in einem Inkubator bei 37 Grad, 5% CO2 -Volumenanteil und 70% Luftfeuchtigkeit für 24, 48 und 72 Stunden kultiviert, und dann wurde die Lösung weggeworfen. Alle Gruppen wurden mit 100 & mgr; l komplettem Kulturmedium zugegeben, das 10% CCK8 -Volumenfraktion enthielt und 60 Minuten inkubiert wurde. Die Absorption der Lösung bei 450 nm wurde unter Verwendung eines ELISA -Lesers gemessen. Die Lebensfähigkeit der Zellen (%) wurde gemäß der Formel (4) berechnet.
Wo: Eine experimentelle Gruppe ist die Absorption der Brunnen, die Zellen und Probenlösung unter UVB -Bestrahlung enthalten; Eine normale Gruppe ist die Absorption der Brunnen, die Zellen und Probenlösung ohne UVB -Bestrahlung enthalten. Eine leere Gruppe ist die Absorption der Brunnen, die Kulturmedium, aber keine Zellen enthalten.
1.4.5 Bestimmung des Melaningehalts
Der Melaningehalt wurde durch die NaOH -Lyse -Methode bestimmt. Nach der Behandlung der Zellen für 72 h gemäß der Methode in Abschnitt 1.4.2 wurde der Überstand verworfen und zweimal mit PBS gewaschen, und 100 & mgr; l NaOH -Wässrigkeit, die 10% DMSO enthielt, wurden nach Volumen (Konzentration von 1 mol/l) zugesetzt. Nach 1 h in einem 90 -Grad -Ofen wurde die Absorption der Lösung bei 490 nm durch einen Enzymmarker bestimmt. Das Experiment wurde dreimal wiederholt. Der Melaningehalt (%) wurde gemäß der Formel (5) berechnet.
1.5 Bestimmung des Inhalts des entzündlichen Faktors und des oxidativen Stressindex
Nach der Behandlung der Zellen für 48 h gemäß der Methode in Abschnitt 1.4.2 wurden die Hakat -Zellen in jeder Gruppe mit einem zentrifugierten Zellschaber gesammelt und der Überstand wurde gesammelt. Der Inhalt von IL -6 und TNF- wurde gemäß den Anweisungen des ELISA-Kits bestimmt.
Nach der Behandlung der Zellen für 48 h gemäß der Methode in Abschnitt 1.4.2 wurden die Hakat -Zellen in jeder Gruppe mit einem Zellschaber gesammelt und die Zellen wurden durch wiederholtes Gefrieren und Auftauen unterbrochen. Die Zellen wurden 10 min bei 12000 R/min bei 4 Grad zentrifugiert und der Überstand wurde gesammelt. Die SOD -Aktivität und der Katzengehalt wurden gemäß den Anweisungen des ELISA -Kits bestimmt.
1.6 Bestimmung des kombinierten Index
Die kombinierte Index (CI) -Methode [20] wurde verwendet, um zu bestimmen, ob PHGS und GLA in verschiedenen Massenverhältnissen eine synergistische Wirkung auf die Hemmung der Tyrosinaseaktivität und Antioxidation hatten. Der Kombinationsindex wurde gemäß der Formel (6) berechnet:
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 zeigt einen antagonistischen Effekt an, Ci =1 zeigt einen additiven Effekt an und CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Datenanalyse
Alle Daten werden als "arithmetischer Mittelwert ± Standardabweichung (𝑥̅ ± 𝑠)" ausgedrückt. Graph Prism 9.5. 0 Software wurde für die statistische Analyse verwendet. Eine Einweg-Varianzanalyse wurde zum Vergleich zwischen mehreren Gruppen verwendet. P<0.05 was considered statistically significant.
